二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株凋亡的影响-论文.pdf

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1、中药药理与临床2014；3O(1)5二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株凋亡的影响’代勇‘，徐世军，刘蓉一，熊敏，苟玲’(成都中医药大学基础医学院，成都611137；成都中医药大学药学院，中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，成都611137)摘要目的：观察二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的影响。方法：采用形态学及MTT法观察二母颗粒组(10g／kg)5％、10％、20％含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖的抑制作用；通过流式细胞法观察药物对

2、细胞凋亡的影响。结果：形态学观察表明二母颗粒含药血清使A549及SMMC-7721细胞株发生形态改变；MTr结果显示二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖有抑制作用，且随合药血清浓度的增高以及作用时间的延长，抑制作用亦有所加强。其中20％含药血清作用于A549及SMMC-7721细胞株48h，10％含药血清作用于A54948h，其OD值与对照组比较均有统计学差异；流式细胞技术检测结果表明20％含药血清作用于A549细胞株24h~．48h，10％含药血清作用于A54948h，与同时间段阴性对照组比较凋亡率明显升高；20％、

3、10％合药血清作用于SMMC-7721细胞株24h及48h，对肿瘤细胞的凋亡率也有明显升高的作用。结论：二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株的增殖有抑制作用，其作用机制与其诱导细胞凋亡有密切的关系。关键词二母颗粒；肺腺癌A549；肝癌SMMC-7721；凋亡t二母颗粒始源于《急救仙方》的二母散，由川贝母、知母2司。PBS磷酸盐缓冲溶液购自ThermoScientific公司。Annexin药组成的现代中药制剂。原方为治疗”治肺劳有热，不能服补V．FITC细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限气之剂者”，由于肿瘤、尤

4、其是肺癌患者后期病机与此相仿，加公司。之组方具有”软坚散结，滋肾清肺”的作用，根据”异病同治”的1．4仪器CO2培养箱(日本SANYO公司)；超净工作台(苏理念，课题组前期考察了二母颗粒对小鼠Lewis肺癌的影响，结州安泰空气技术有限公司)；倒置相差显微镜(德国Olympus公果表明其具有良好的抑制Lewis肺癌生长、转移等作用，且对肿司)；DNM-9602G全自动酶标仪(北京普朗新技术有限公司)；瘤血管生成具有显著的抑制作用⋯。本论文考察了二母颗粒流式细胞仪(美国BeckmanCoulter)。含药血清对肺腺癌A549及肝癌sMMC—7

5、721细胞增殖和凋亡的1．5方法将冻存于液氮中的A549，SMMC-7721细胞株复温，影响，籍以为二母颗粒防治肿瘤提供更加充分的实验依据。离心洗涤后转入细胞培养瓶中，在含有10％的小牛血清，青霉素和链霉素各100U／lIIl的RPMI一1640培养基、37℃、5％c021材料与方法培养箱中常规培养。每天换液，待细胞长至80％融合时，以0．1％胰蛋白酶消化1—2rain，镜下观察当细胞皱缩变圆时，加入1．1试验药物二母颗粒，由成都中医药大学炮制与制剂教研含小牛血清的培养液终止消化，用吸管吹打细胞使之完全脱落，室制备。川贝母药材购于成都荷花

6、池中药材专业批发市场，经1500rpm离心5rain收集细胞，加入新鲜培养基混匀，分装接种四川大学华西药学院王曙教授鉴定来源于百合科植物川贝母于培养瓶传代。FritillariacirrhosaD．Don的干燥鳞茎。知母饮片(生)，购于成取SD大鼠按体重，随机分为2组，即二母颗粒组(1Og／kg)都国嘉集团新荷花饮片公司，批号：1009047，产地：河北，经成和空白组，每组1O只。-@颗粒的剂量设置参照前期急性毒性都中医药大学药学院卢先明教授鉴定来源于百合科植物知母试验结果，即最大耐受量作为本次实验的给药剂量，将二母颗粒Anemarrhe

7、naasphodeloidesBge．的干燥根茎。将川贝母粉碎成制备为0．5s／,~CMC混悬溶液，按2ml／lOOg体重灌胃，空白组最细粉(过8号筛)，知母饮片加6倍量水煎煮3次，每次给予等体积生理盐水。连续给药5d，每天1次。于末次给药1h30rain，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1．35(6o℃)后，10％水合氯醛麻醉大鼠，腹主动脉无菌取血，静置2h后，的稠膏，加入川贝母细粉及糊精，混匀，加入65％乙醇调整软材3000rpm离心lOmin，吸取血清。同组血清合并，经56℃、30min湿度后制成颗粒，干燥，即得，批号：20l

8、10611。灭活，0．221a,m微孔滤膜过滤除菌，0．5ml／支分装，置．80~C冰箱1．2动物和细胞株SD大鼠，SPF级，体重250～280g，雄性，保存备用。四川省医学科学院实验动物研究