白花丹参和紫花丹参生化标记分析论文

《白花丹参和紫花丹参生化标记分析论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、白花丹参和紫花丹参生化标记分析论文【摘要】目的分析白花丹参和紫花丹参在蛋白水平的遗传差异。方法利用叶片过氧化物酶和种子贮藏蛋白两种生化标记对白花丹参和紫花丹参进行了分析。结果同工酶分析表明，两种丹参间过氧化物酶同工酶谱存在差异；贮藏蛋白分析表明，丹参种子蛋白主要是以盐溶性蛋白为主，水溶蛋白和醇溶蛋白较少，碱溶性蛋白更少；两种丹参种子贮藏蛋白谱带之间的差异性不明显。结论二者在蛋白水平存在一定差异。【关键词】紫花丹参；白花丹参；贮藏蛋白；同工酶；聚丙烯酰胺凝胶电泳法；生化标记Abstract：ObjectiveToanalyzeicalmarkers

2、(perodiaseandstorageprotein).MethodsTicalmakersofperodiaseandstorageproteinidegelelectrophoresis,mostofstorageproteinse;PAGE;Biochemicalmarker丹参Salviamiltiorrhiza味苦、性微寒，功能活血祛淤，安神宁心，排脓止痛［1］.freell稀释4倍的浓缩胶缓冲液（pH=6.7），冰浴超声提取15min，8000r/min，0℃离心20min。上清液加入等体积40%蔗糖溶液混匀，作为供试溶液，可在4℃

3、冰箱内储存备用。1.2.2蛋白质提取蛋白质提取分为分步提取和一次性提取两种。分步提取主要研究丹参种子中各类蛋白质的组成及比例；一次性提取主要比较在不同提取液的情况下，蛋白质谱带的带型。分步提取方法：取丹参种子粉碎后称取0.1g，加入600μl水，在60℃水浴中提取40min，10000r/min离心5min，取上清液备用，再用水按同样方法冲提1次，离心弃掉上清液。然后加入600μl2.5%NaCl溶液，用同样方法提取上清液备用，再用2.5%NaCl冲提1次，离心弃掉上清液，用水冲洗1次。再加入400μl的50%异丙醇提取液，在同样条件下，提取上清

4、液备用。最后加入400μl0.2%NaOH，同样条件，提取上清液备用。最后提取的各种蛋白质溶液，和样品处理液（20%甘油，0.1%溴酚蓝，20%浓缩胶缓冲液）等体积混合后用于电泳分析。一次性提取方法：丹参种子粉碎后分别称取0.05g，分别加入600μl水，600μl2.5%盐溶液，600μl50%异丙醇和600μlNaOH，在60℃水浴中提取40min，离心取上清液。按分步提取法加入样品处理液后电泳［7］。1.2.3电泳方法聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）对过氧化物酶和贮藏蛋白进行电泳分析。DYY-III30稳压、稳流型电泳仪（北京六一仪器厂），Y

5、Y0155-94型电泳槽，采用垂直板凝胶电泳，凝胶板22cm×10cm。凝胶为30%丙烯酰胺、1%甲叉双丙烯酰胺，分离胶10%，浓缩胶3%，以TEMED和过硫酸铵为催化系统，以Tris-甘氨酸为电极缓冲液，150V稳压条件下电泳4h。1.2.4染色胶板剥离后，用于跑过氧化物酶的胶放在联大茴香胺染色液中，间歇性摇动，染色2h，拍照。蛋白电泳的胶放在考马斯亮蓝染色液(0.08%考马斯亮蓝，10%三氯乙酸)中染色2h。1.2.5脱色种子贮藏蛋白电泳的胶放至25%甲醇，10%乙酸溶液中脱色直到看到电泳条带，拍照。2结果2.1丹参叶片过氧化物酶同工酶分析白

6、花丹参在5.1，7.9，8.7cm处各有1条带，共3条；而紫花丹参在6.3，7.5，8.2，8.7cm处各有1条带，共4条（见图1）。说明不同表型的丹参品种间在同工酶分析上存在着差异，理论上可以以此作为品种划分的依据之一。2.2丹参种子蛋白质种类的分析用分步提取法对白花丹参和紫花丹参两品种种子提取得到的水溶性蛋白、盐溶性蛋白、醇溶性蛋白和碱溶性蛋白电泳结果见图2。由分析结果看出，在丹参种子中以盐溶性蛋白为主，水溶性蛋白和醇溶性蛋白较少，碱溶性蛋白含量极少，在电泳时难以区分。所以在研究丹参种子贮藏蛋白时应以盐溶性蛋白为主。1．紫花丹参2．白花丹参图

7、1丹参叶片过氧化物酶同工酶分析（略）Ⅰ：分步提取Ⅱ：分别提取1～4：白花丹参5～8：紫花丹参1、5：水溶蛋白2、6：2.5%NaCl盐溶蛋白3、7：50%异丙醇醇溶蛋白4、8：0.2%NaOH碱溶蛋白图2丹参种子贮藏蛋白分析（略）2.3不同提取液单一提取蛋白质分析对于同一材料，分别用不同提取液一次性提取，然后电泳。水溶性蛋白、盐溶性蛋白、醇溶性蛋白的电泳谱带见图2。结果表明：①不同提取液比分步提取法可得到较清晰的电泳谱带，说明单一提取蛋白含量较高。以盐溶性蛋白的谱带最清晰。②各种提取液提取的蛋白质电泳谱带的条数不同，2.5%NaCl提取的蛋白谱带

8、最多，为5条，分别在2.7，3，3.6，4.2和4.6cm处；水和50%异丙醇提取的蛋白谱带为中等，均为3条；0.2%NaOH提取的蛋白