缺血后处理对缺血再灌注大鼠肠黏膜的抗损伤作用

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1、缺血后处理对缺血再灌注大鼠肠黏膜的抗损伤作用作者：褚薇薇，武步强，沙焕臣，王殿华【摘要】目的探讨缺血后处理对缺血再灌注大鼠肠黏膜的抗损伤作用。方法复制SD大鼠肠缺血再灌注损伤模型。实验分为4组(n=8)：假手术组(S)、缺血再灌注组(I/R)、缺血预处理组(IPC)、缺血后处理组(Ipost)。比较各组大鼠肠黏膜丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)的活性变化；末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测肠黏膜细胞凋亡发生率；Chius评分法观察肠黏膜的损伤情况。结果与I/R组相比，IPC组和Ipos

2、t组大鼠肠黏膜MDA含量和MPO活性均显著降低，而SOD活性明显升高；再灌注后可见明显的肠黏膜细胞凋亡现象，Ipost组和IPC组凋亡指数较I/R组显著下降，组织病理损伤亦明显减轻。Ipost组和IPC组相比，各项指标无显著性差异。结论缺血后处理可通过抑制再灌注后氧自由基的过量产生，保护抗氧化系统，从而抑制肠黏膜细胞凋亡，减轻肠缺血再灌注损伤。【关键词】缺血再灌注；缺血后处理；缺血预处理；细胞凋亡；肠黏膜肠缺血再灌注损伤与临床许多疾病和病理过程有密切关系，细胞凋亡在其损伤的病理过程中发挥重要作用[12]。1986年Murry等提出心肌在经受多次短暂缺血再灌后

3、，能在随后的长时间缺血中延迟并减轻心肌损伤，即缺血预处理。已证实，这一现象存在于不同种属的不同组织器官中[34]。但由于这种预处理需在缺血前施予，从而使其临床应用价值受限。Zhao等[5]于2003年首先在心脏缺血再灌注损伤的实验研究中证明，在再灌注一开始采用数个循环的短暂的灌注/阻断之后全面恢复心脏的再灌注，能对缺血再灌注心脏产生抗损伤作用，从而提出了一种新的外科干预措施——缺血后处理。随后的研究[6]也证实缺血后处理能够缩小心肌梗死范围，降低心律失常的发生率。这种缺血后处理对缺血再灌注器官的抗损伤作用是否具有普遍性，目前尚不能确定。因此，本研究拟通过复制大

4、鼠肠缺血再灌注损伤模型，研究缺血后处理对缺血再灌注大鼠肠黏膜的抗损伤作用，并探讨其可能的机制，为肠缺血再灌注的临床治疗提供新的理论依据。　　1材料与方法　　1.1主要试剂　　丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，原位凋亡检测试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供，其他试剂均为国产分析纯。　　1.2实验动物　　健康雄性SpragueDa进腹，用温盐水纱布将肠管推向左侧腹腔，暴露右肾内上方的肠系膜根部，找到肠系膜上动脉(superiormesentericartery,SMA)，在其根部用无创伤血管夹

5、夹闭阻断SMA血运45min，造成肠缺血模型，然后松夹，再灌注1h后经颈动脉放血处死。　　1.2.2动物分组及处理　　动物随机分为4组(n=8)：①假手术(S)组：仅行开腹，分离SMA不夹闭；②缺血再灌注(I/R)组：方法见模型复制；③缺血预处理(IPC)组：夹闭SMA5min和松夹5min作为预处理，2个循环，余同I/R组；④缺血后处理(Ipost)组：缺血45min后即刻行3个循环的灌注30s/阻断30s，余同I/R组。　　1.3标本收集　　动物被处死后，取小肠回盲部10cm以上的肠管。经冰盐水漂净，滤纸吸干，沿肠管长轴切开，用载玻片轻轻刮取肠黏膜部分，立即-

6、70℃分装冻存，2cm肠组织经40g/L甲醛溶液固定，常规制备小肠全层组织石蜡切片，分别进行细胞凋亡检测和常规HE染色。　　1.4观察项目　　①分光光度法测定肠黏膜MPO、SOD活性以及MDA含量。严格按照说明书操作。②光镜下观察组织形态学改变。按Chiu氏六级评分分析，取平均值。③TUNEL法检测肠黏膜细胞凋亡。按TUNEL试剂盒步骤进行，以胞核呈棕黄色者为阳性。每张切片均在高倍镜(400倍)视野下随机取5个视野，计数凋亡细胞数目及总细胞数目。凋亡指数=凋亡细胞数目/总细胞数目×100%。以5个视野的均值代表每只动物的凋亡指数。　　1.5统计学处理　　应用SPSS1

7、1.5软件进行统计学处理。实验所得数据用均数±标准差(±s)表示，组间比较采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1肠黏膜MDA含量和SOD、MPO活性的变化　　与I/R组相比，Ipost组和IPC组大鼠肠组织MDA含量和MPO活性均显著降低(P<0.01)，而SOD活性则明显升高(P<0.01)；Ipost组与IPC组相比，各项指标无显著性差异(表1)。表1肠黏膜MDA含量及SOD、MPO活性变化（略）　　2.2肠黏膜组织病理学改变　　光镜下，S组肠黏膜绒毛完整，上皮下间隙无扩展，损伤均为0级；I/R