缺血后处理对缺血再灌注大鼠肠黏膜的抗损伤作用论文

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1、缺血后处理对缺血再灌注大鼠肠黏膜的抗损伤作用论文褚薇薇，武步强，沙焕臣，王殿华【摘要】目的探讨缺血后处理对缺血再灌注大鼠肠黏膜的抗损伤作用。方法复制SD大鼠肠缺血再灌注损伤模型。实验分为4组(n=8)：假手术组(S)、缺血再灌注组(I/R)、缺血预处理组(IPC)、缺血后处理组(Ipost)。比较各组大鼠肠黏膜丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)的活性变化；末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测肠黏膜细胞凋亡发生率；Chius评分法观察肠黏膜的损伤情况。结果与I/R组相比，

2、IPC组和Ipost组大鼠肠黏膜MDA含量和MPO活性均显著降低，而SOD活性明显升高；再灌注后可见明显的肠黏膜细胞凋亡现象，Ipost组和IPC组凋亡指数较I/R组显著下降，组织病理损伤亦明显减轻。Ipost组和IPC组相比.freel进腹，用温盐水纱布将肠管推向左侧腹腔，暴露右肾内上方的肠系膜根部，找到肠系膜上动脉(superiormesentericartery,SMA)，在其根部用无创伤血管夹夹闭阻断SMA血运45min，造成肠缺血模型，然后松夹，再灌注1h后经颈动脉放血处死。1.2.2动物分组及处理动物随机分为4组(n=8)：①假

3、手术(S)组：仅行开腹，分离SMA不夹闭；②缺血再灌注(I/R)组：方法见模型复制；③缺血预处理(IPC)组：夹闭SMA5min和松夹5min作为预处理，2个循环，余同I/R组；④缺血后处理(Ipost)组：缺血45min后即刻行3个循环的灌注30s/阻断30s，余同I/R组。1.3标本收集动物被处死后，取小肠回盲部10cm以上的肠管。经冰盐水漂净，滤纸吸干，沿肠管长轴切开，用载玻片轻轻刮取肠黏膜部分，立即-70℃分装冻存，2cm肠组织经40g/L甲醛溶液固定，常规制备小肠全层组织石蜡切片，分别进行细胞凋亡检测和常规HE染色。1.4观察项目①

4、分光光度法测定肠黏膜MPO、SOD活性以及MDA含量。严格按照说明书操作。②光镜下观察组织形态学改变。按Chiu氏六级评分分析，取平均值。③TUNEL法检测肠黏膜细胞凋亡。按TUNEL试剂盒步骤进行，以胞核呈棕黄色者为阳性。每张切片均在高倍镜(400倍)视野下随机取5个视野，计数凋亡细胞数目及总细胞数目。凋亡指数=凋亡细胞数目/总细胞数目×100%。以5个视野的均值代表每只动物的凋亡指数。1.5统计学处理应用SPSS11.5软件进行统计学处理。实验所得数据用均数±标准差(±s)表示，组间比较采用方差分析，以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.

5、1肠黏膜MDA含量和SOD、MPO活性的变化与I/R组相比，Ipost组和IPC组大鼠肠组织MDA含量和MPO活性均显著降低(P0.01)，而SOD活性则明显升高(P0.01)；Ipost组与IPC组相比，各项指标无显著性差异(表1)。表1肠黏膜MDA含量及SOD、MPO活性变化（略）2.2肠黏膜组织病理学改变光镜下，S组肠黏膜绒毛完整，上皮下间隙无扩展，损伤均为0级；I/R组大鼠肠黏膜有多部位不同程度的上皮脱落、黏膜下水肿、毛细血管扩张、瘀血等；Ipost组和IPC组病理学改变有所减轻，组织损伤程度评分低于I/R组(P0.01)。2.3肠

6、黏膜细胞凋亡率的变化S组大鼠肠绒毛顶部、固有层和黏膜下层有极少量散在分布的阳性凋亡细胞(图1A)；I/R组阳性细胞数量明显增加，分布范围从绒毛顶部扩大到中、底部，固有层和黏膜下层细胞凋亡亦明显加重，凋亡率大于S组(P0.01，图1B)；Ipost组和IPC组阳性细胞数量及分布范围则明显少于I/R组(P0.01，图1C、1D)，Ipost组和IPC组相比无统计学意义。3讨论肠缺血再灌注损伤发生机制复杂，其中以氧自由基的损伤为最重要的发病环节。研究发现肠缺血再灌注后肠黏膜细胞以凋亡为主，而氧化损伤是细胞发生凋亡的重要诱因7。关于氧自由基诱发细

7、胞凋亡的机制，目前大多认为氧自由基可直接与细胞膜表面不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，也可导致线粒体结构和功能受损，引起线粒体膜电位下降、呼吸链解偶联、细胞色素C和其他促凋亡因子释放。细胞色素C、凋亡蛋白活化因子(Apaf1)和caspase9复合物的形成，激活caspase3，后者启动内在的细胞凋亡级联反应8。本实验发现，I/R组大鼠肠黏膜MPO活性和脂质过氧化物终产物MDA含量增加，而抗氧化物酶SOD活性显著降低，表明其保护组织细胞免受毒性氧自由基损伤的效能减弱，过量的氧自由基可直接造成生物膜结构和功能的破坏，触发细胞凋亡的发生。研究表明

8、，在再灌注最初的几分钟内由于突然获得氧的情况将会加速ATP的合成，但同时也加剧了细胞内Ca2+超载和中性粒细胞呼吸爆发，产生大量氧自由基