oh的体外活性分析及其对四氧嘧啶糖尿病大鼠影响的研究论文

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1、OH的体外活性分析及其对四氧嘧啶糖尿病大鼠影响的研究论文摘要目的：进一步验证ProProhGHRH(144)OH的生物活性，并观察其对糖尿病（DM）大鼠GHRHGHIGF1轴的影响。方法：（1）取正常大鼠垂体6个，每个垂体分为3份后在体外孵育，将垂体随机分成4组，分别加入0.01、0.1、1.0mgL-1的ProProhGHRH(144)OH和2.0mgL-1hGHRH，测定加药前、后GH含量改变。（2）将DM大鼠随机分为GHRH类似物组、GHRH组和DM对照组，分别给予ProProhGHRH(144)OH1mgL-1、hGHRH(144)OH2m

2、gL-1和0.9％生理盐水，另取正常大鼠作为正常对照.freelgL-1的ProProhGHRH(144)OH与hGHRH组3组之间比较，均P＜0.05。（2）DM3组和正常对照组血胰岛素含量结果示，正常对照组与DM3组之间比较，均P＜0.01。血IGF1含量4组之间比较均P＞0.05。血GH含量DM对照组与正常对照组之间比较，P＜0.05。GHRH组与DM对照、正常对照组3组之间比较,均P＜0.05。结论：ProProhGHRH(144)OH是一种具有强大促GH分泌活性的GHRH类似物，这种活性存在剂量依赖性，当四氧嘧啶DM大鼠给予ProProh

3、GHRH(144)OH后，能显著增加DM大鼠垂体的敏感性。关键词ProProhGHRH(144)OH；生长激素释放激素类似物；生长激素释放激素；生长激素；类胰岛素样生长因子1；四氧嘧啶；糖尿病；大鼠中图分类号R587.1；R33文献标识码A16716264（2006）05036904近年来，人们利用分子生物学原理和方法人工合成了多种生长激素释放激素（GHRH）类似物，并在糖尿病（DM）患者和大鼠模型上研究GHRHGHIGF1轴对GHRH类似物的反应。本试验就是进一步验证GHRH类似物ProProhGHRH(144)OH的生物活性，并观察其对DM大鼠

4、GHRHGHIGF1轴的影响。1材料与方法1.1实验动物与主要试剂体重为200~250g的雌性SD大鼠，由东南大学医学院实验动物中心提供。Krebs缓冲液（NaCl118mmolL-1、KCl4.7mmolL-1、CaCl22.5mmolL-1、MgSO47H2O1.2mmolL-1、NaHCO325mmolL-1、KH2PO41.2mmolL-1、葡萄糖11mmolL-1、pH7.4）；四氧嘧啶购自Sigma公司，用生理盐水配成浓度为40gL-1；人GH放免试剂盒、人IGF1放免试剂盒、人胰岛素放免试剂盒均购自天津九鼎生物有限公司。1.2ProP

5、rohGHRH(144)OH的体外活性分析SD大鼠6只，在30min内取出大鼠垂体6个，将每个垂体分为3份，所有垂体均孵育在装有1mlKrebs缓冲液的玻璃试管中，共孵育5h。18份垂体随机分成4组：A组，4份垂体，在孵育2h末取出缓冲液，测定GH含量作为空白对照，然后加入0.01mgL-1ProProhGHRH(144)OH0.1ml和新缓冲液，孵育1h后取出缓冲液测量GH浓度，再重复加药测量2次；B组,4份垂体，在孵育2h末取出缓冲液测GH含量作为空白对照，然后加入0.1mgL-1ProProhGHRH(144)OH0.1ml和新缓冲液，孵育1

6、h后取出缓冲液测量GH浓度，再重复加药测2次；C组,5份垂体,在孵育2h末取出缓冲液测GH含量作为空白对照，然后加入1.0mgL-1ProProhGHRH(144)OH0.1ml和新缓冲液，孵育1h后取出缓冲液测GH浓度，再重复加药测2次；D组，5份垂体，在孵育2h末取出缓冲液测GH含量作为空白对照，然后加入2mgL-1hGHRH0.1ml和新缓冲液，孵育1h后取出缓冲液测GH浓度，再重复加药测量2次。比较各组间加入药物前后的GH浓度变化。1.3DM大鼠建模及分组将DM大鼠随机分为GHRH类似物组、GHRH组和DM对照组，每组10只。建模方法为：S

7、D大鼠腹腔注射四氧嘧啶（200mgkg-1），第3天测空腹血糖＞16.8mmolml-1为模型建立成功。GHRH类似物组每日腹腔注射ProProhGHRH(144)OH1mgL-1；GHRH组每日腹腔注射hGHRH(144)OH2mgL-1,DM对照组每日腹腔注射0.9%生理盐水。另取10只正常大鼠作为正常对照组，每日腹腔注射生理盐水。1.4标本收集第14天试验终止时所有大鼠禁食12h，常规碘伏消毒腹部皮肤，切开皮肤，股动脉切开取血4~5ml，标记，室温下静置1h，用低温离心机4℃下3000rmin-1离心15min，取血清，-70℃冻存待测血GH

8、、IGF1和胰岛素含量。1.5统计学处理实验结果以x-±s表示，统计学处理均采用t检验，以P＜0.05判断为差异有显著性意