oh的体外活性分析及其对四氧嘧啶糖尿病大鼠影响的研究

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1、OH的体外活性分析及其对四氧嘧啶糖尿病大鼠影响的研究[摘要]目的：进一步验证ProProhGHRH(144)OH的生物活性，并观察其对糖尿病（DM）大鼠GHRHGHIGF1轴的影响。方法：（1）取正常大鼠垂体6个，每个垂体分为3份后在体外孵育，将垂体随机分成4组，分别加入0.01、0.1、1.0mg・L-1的ProProhGHRH(144)OH和2.0mg・L-1hGHRH，测定加药前、后GH含量改变。（2）将DM大鼠随机分为GHRH类似物组、GHRH组和DM对照组，分别给予ProProhGHRH(144)OH1m

2、g・L-1、hGHRH(144)OH2mg・L-1和0.9％生理盐水，另取正常大鼠作为正常对照，测定DM3组和正常对照组血GH、IGF1和胰岛素含量。结果：（1）ProProhGHRH(144)OH体外活性结果示，0.1、1.0mg・L-1的ProProhGHRH(144)OH与hGHRH组3组之间比较，均P＜0.05。（2）DM3组和正常对照组血胰岛素含量结果示，正常对照组与DM3组之间比较，均P＜0.01。血IGF1含量4组之间比较均P＞0.05。血GH含量DM对照组与正常对照组之间比较，P＜0.

3、05。GHRH组与DM对照、正常对照组3组之间比较,均P＜0.05。结论：ProProhGHRH(144)OH是一种具有强大促GH分泌活性的GHRH类似物，这种活性存在剂量依赖性，当四氧嘧啶DM大鼠给予ProProhGHRH(144)OH后，能显著增加DM大鼠垂体的敏感性。[关键词]ProProhGHRH(144)OH；生长激素释放激素类似物；生长激素释放激素；生长激素；类胰岛素样生长因子1；四氧嘧啶；糖尿病；大鼠[中图分类号]R587.1；R33[3讨论　由于天然GHRH半衰期较短、生物活性不强，多年来人们不断在GHRH不同部位进行缺失和定

4、位突变的研究，合成了大量GHRH类似物，方式主要有N端变构［1］和C端延伸［2］两种。唐松山等【34】就是在N端变构，利用分子生物学方法合成ProProhGHRH(144)OH的。目前，衡量GHRH及其类似物生物活性的方法主要有两种：（1）体外活性分析。取动物或人流产死胎垂体体外培养,给予GHRH类似物刺激，观察其促进GH分泌量与给予天然GHRH促GH分泌量的差异来衡量其活性。（2）体内活性分析。于实验动物或人体直接给予GHRH类似物刺激，比较其体内血中GH含量与给予天然GHRH刺激时GH含量的差异来衡量其活性。其中以体外分析法更为精确，因为

5、它直接在垂体层面检测分泌GH的能力，与在血中检测相比，避免了多种体液激素的影响。在本试验中，浓度为0.01、0.1、1.0mg・L-1的ProProhGHRH(144)OH和hGHRH组的净GH浓度分别为(2.0±1.3)、(8.1±2.7)、(12.5±3.2)、(4.0±0.3)mIU・ml-1，ProProhGHRH(144)OH浓度为0.1、1.0mg・L-1时与hGHRH组比较，P＜0.05，提示ProProhGHRH(144)OH促GH分泌能力有剂量依赖性，并且较hGHRH拥有更强的促GH

6、分泌能力。与唐松山等[3]的试验结果相似，从而验证了唐松山等人试验结果的可重复性与正确性。本试验中，GHRH类似物组、GHRH组、DM对照组与正常对照组血胰岛素含量比较，均P＜0.01。提示四氧嘧啶大量破坏胰岛B细胞，使其分泌胰岛素减少，这也验证了四氧嘧啶建立DM模型的理论基础。本试验中GHRH类似物组、GHRH组、DM对照组与正常对照组之间的血IGF1含量比较，均P＞0.05，与Flyvbjerg等［56］的结果相同。可能与DM存在胰岛素抵抗，IGF1受体也随之减少有关。试验中GHRH类似物组、GHRH组、DM对照组大鼠的GH浓度低于正常大

7、鼠，GH的变化情况与DM患者的血GH升高情况相反。这一结果出现的可能原因是DM大鼠的外周组织能分泌足够的生长抑素抑制垂体GH的分泌，还可能与IGF1的负反馈抑制作用减弱有关。GHRH类似物组、GHRH组与DM对照组3组之间两两比较，均P＜0.05，结果与Catalina等[69]的报道相似。说明在DM时给予ProProhGHRH(144)OH，GH对ProProhGHRH(144)OH的敏感性增强。正常情况时，GHRHGHIGF1轴中3种激素相互调节维持着相对的平衡。当GHRH增多时垂体分泌GH增多，GH增多又可促进IGF1分泌增多来负反馈抑

8、制GH增多。但在本试验中，给予ProProhGHRH(144)OH和hGHRH后，GH较DM对照组分泌增多，IGF1却并没有明显增多，说明DM时GHRHGHIGF1