lrp16基因启动子活性分析论文

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1、LRP16基因启动子活性分析论文.freeloterActivityAbstractThestudyedtoanalyzethecharacteristicsofLRP16genepromoteranditsactivityinordertoexplorethepossibleregulationmechanismofLRP16geneexpression.A2.6kbgenomicDNAsequenceofLRP165’-endNCBIbyBLASTsoftahealthyblooddonorDN

2、AsampleplifiedbyPCR，thenidentifiedbyDNAsequencingandsemi-nestPCR.Theverifiedsequenceseachother.All7sequencesetotheseGenBankdescribed.Atlast，all7promotersequencesotersequencecanbefreelyobtainedfromNCBIdatabase.ItisconcludedthatLRP16promoterisastandardty

3、peⅡpromoteranditsactivityisstrongestintheregionfrom-200to-600bp.Keyoter；geneexpressionLRP16基因是于力等利用限制性酶切基因扫描（restrictionlandmarkgenomicscanning，RLGS）和cDNA末端快速扩增(rapidamplificationofcDNAend，RACE)技术克隆到的一条白血病相关基因［1-3］。该基因定位于第11号染色体长臂11区，其编码的基因翻译产物是一种核蛋白。此

4、外通过SAGE（serialanalysisofgeneexpression）数据库分析还发现，LRP16基因在多种性激素相关的肿瘤中均有高表达［4］，提示LRP16基因与肿瘤发生密切相关。通过在乳腺癌细胞系中的研究发现，LRP16基因是一个雌激素受体β调控的下游基因［5］，作为进一步研究LRP16基因表达调控、活性及其生物学作用的前期工作，我们克隆了LRP16基因启动子，并对LRP16基因启动子区域近2.7kb的DNA序列进行了分析。材料和方法主要试剂与仪器FPROGO2D型PCR仪（Techno

5、lCambridgeLtd.公司产品）。质粒提取试剂盒（iniprepsDNAPurificationSystem产品），PCR产物回收试剂盒（-TEasyVector，Superfecttransfectionreagent，TD-20/20型Luminometer荧光素酶检测仪。人类基因组DNA的提取及引物设计选用健康献血员的外周血分离单个核细胞，常规方法提取基因组DNA，并用HindIIIDNA酶切处理。LRP16启动子及亚克隆启动子序列钓取及引物设计LRP16启动子、亚克隆启动子序列的钓取

6、以LRP16基因cDNA序列全长作为探针，在NCBI(http://.ncbi.nlm.nih.gov/)的HumanGenomicDatabase(.ncbi.nlm.nih.gov/genome/)中利用Blast程序进行搜索，并截取LRP16基因5’侧翼2.7kb基因组DNA序列。引物设计利用Primer软件包设计9个上游引物和1个下游引物（上海生工生物工程公司合成），其中每个亚克隆启动子的序列长度相差0.4kb左右，引物名称和序列如下（括号内数字表示的是扩增产物长度，英文字母表示酶切位点，相

7、对应的PCR产物分别为S0-S6）：LRP16基因启动子-荧光素酶报道重组子的构建采用上述引物扩增出7条3’端平齐，5’端不等大小相差200bp左右的启动子和亚克隆启动子DNA片段，将此片段克隆纯化并插入pGL3-Basic质粒构建7个LRP16基因启动子和亚克隆启动子荧光素酶载体，具体操作方法详见