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1、ERK信号转导通路在哮喘大鼠气道重塑中的作用论文【摘要】目的研究在哮喘大鼠气道平滑肌细胞ASMC（airoothmusclecell）中ERK信号转导通路对哮喘气道重塑中的作用。方法原代培养ASMC,实验设未干预组（A组）、ERK阻断剂（U0126）组（B组）、PDGF组（C组）、PDGF+ERK阻断剂组（D组）。B组又分为B1组、B2组、B3组、B4组,加入浓度分别为0.1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L的U0126；C组又分为C1组、C2组、C3组、C4组，加入浓度分别为1μg/L、10μg/L、25μg
2、/L、50μg/L的PDGF-BB。免疫组化法测ERK1蛋白的表达(仅测A、B4、C4、D组)，RT-PCR法测其mRNA表达。结果ASMC中ERK1蛋白表达B4组显著低于A组（P0.01），C4组显著高于A组（P0.01），D组与A组相比差异无统计学意义（P0.05）；B1组、B2组、B3组、B4组ERK1mRNA表达均显著低于A组（P0.01），U0126以浓度依赖性的方式抑制PDGF-BB诱导ASMC中ERK的活化；C1组、C2组、C3组、C4组ERK1mRNA表达均显著高于A组（P0.01），ERK1mRNA的表达与PDGF－BB
3、存在明显的浓度依赖关系，D组则与A组相比差异无统计学意义（P0.05）。结论PDGF可剂量依赖地激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路.freelodellinginarioothmusclecellsofasthmaticrats.MethodsSmothmusclecellsofasthmaticratsol/L、1μmol/L、5μmol/Lrespectively;groupCmunohistochemistrytechnique，ThemRNAexpressionsofERK1portanteffectonthisprocess.【
4、KeyaRatsAirodelingAirothmusclecells气道重塑（airodelling）是支气管哮喘（简称哮喘）的特征性病理生理改变之一，1992年哮喘“气道重塑（airodeling）”的概念被明确提出。气道平滑肌细胞(ASMC)增殖在气道重构中占有十分重要的地位,有报道显示哮喘病人气道平滑肌厚度是对照组的3倍［1］，故体外气道平滑肌细胞(airoothmusclecells,ASMC)培养是研究哮喘发病机制的重要手段。ERK信号转导通路广泛存在于多种细胞内,.freelRNA在哮喘大鼠气道平滑肌细胞内表达情况,探讨ER
5、K信号通路对哮喘气道重塑的作用。1材料与方法1.1实验材料（1）主要试剂：DMEM培养基(法国Bioad6/7多克隆抗体(美国SantaCruz公司)，重组大鼠PDGF-BB（美国RD公司），U0126（美国CellSingnalTechnology公司），Trizol(美国Invitrogen公司),RT-PCR试剂盒(美国Fermentas公司),ERK1和GAPDH引物(上海生工合成)序列如下:ERK1上游引物:5′-GACTCCTACCTGAAGCATAC-3′,ERK1下游引物:5′-TCCTTGACACGCAGAATG-3′,
6、产物203bp;GAPDH上游引物:5′-CAAGTTCAACGGCACAGTCAA-3′,GAPDH下游引物:5′-TGGTGAAGACGCCAGTAGACTC-3′,产物140bp。（2）实验动物：SPF级健康雄性SD（Sprague－Dal［内含OVA1mg和Al(OH)3100mg］；激发阶段，第15天开始以1％OVA生理盐水溶液雾化吸入，隔天1次，每次30min，共60d，以备下一步哮喘大鼠ASMC培养所用。（2）哮喘大鼠ASMC的培养和鉴定:取已建立哮喘模型大鼠，以胶原酶-胰酶混合消化法培养哮喘大鼠ASMC,细胞生长融合后,用
7、0.25%的胰蛋白酶消化,以（107～108）·L-1的密度传代培养,对细胞进行形态学观察并对细胞内平滑肌肌动蛋白α-actin进行免疫细胞化学染色,95%的细胞呈阳性着色,证实细胞为ASMC；取生长状态良好的3～5代细胞用于实验。（3）哮喘大鼠ASMC的分组：哮喘大鼠ASMC按加入药物及浓度的不同分为未干预组（A组）,加无血清DMEM2ml；ERK阻断剂组（B组）,根据药物干预浓度不同分为B1、B2、B3、B4四组，分别加含U0126浓度为0.1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L的DMEM2ml；PDGF组（
8、C组）,根据药物干预浓度不同分为C1、C2、C3、C4四组，分别加浓度1μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L的DMEM2ml；PDGF+ERK阻断剂组（D组），加含PDGF-BB
