水飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制

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1、水飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制作者：孙羿　曾津　张栋　王新阳　朱国栋　祝广峰　程鹤鹏　贺大林【摘要】　　目的研究水飞蓟宾(Silibinin,SB)在体外对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其相关机制。方法采用MTT法观察不同浓度SB对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用；倒置显微镜下观察细胞形态变化；RTPCR检测凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达变化。结果MTT检测发现：随着SB浓度增加和作用时间延长，对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用增强，且各组间比较均有显著性差异(P<0.01)，并呈时间

2、剂量依赖关系；倒置显微镜发现应用SB干预后，5637细胞体积缩小，变形，胞浆浓缩，核固缩深染；人膀胱癌细胞株5637中Survivin的mRNA表达随着SB浓度增加和时间延长相应下降。结论SB可抑制人膀胱癌细胞株5637的增殖；并下调凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达。【关键词】水飞蓟宾；癌；膀胱癌；增殖；survivin；人膀胱癌细胞株5637　　Effectofsilibininonproliferationofhumanbladdercancercell　5637invitroandrelatedmechanism　　ABSTR

3、ACT:ObjectiveTodeterminetheeffectsofsilibininoninhibitingtheproliferationof5637cellinvitroandtoinvestigatetherelatedmechanism.MethodsThecellgroicroscope.Theexpressionofsurvivin(inhibitorofapoptosisprotEin)mRNAinedbyreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR).Results

4、Silibinintreatmentof5637cellsresultedinamoderatetostronggroedependentmanner.Thereorphologicalchangesof5637aandpyosisednucleusicroscope.ThereRNAbetanbladdercancer5637cellsanddoa;bladdercancer;proliferation;survivin;5637cellline　　水飞蓟素(SM)是从菊科植物水飞蓟中提取的黄酮类化合物，其组份中水飞蓟宾(silibinin

5、,SB)含量最多，生物活性也最强。已知SB具有抗自由基活性、抗脂质过氧化、抑制5脂氧合酶等多种作用。近几年来研究还发现SB对各种上皮源性的肿瘤如前列腺癌、结肠癌、膀胱癌、肺癌等均具有良好抑制作用，并且已进入治疗前列腺癌的I期临床试验，但关于SB对膀胱癌的作用，国内外研究甚少。本文将研究SB在体外对人膀胱癌细胞株5637的抗增殖作用及其相关机制。　　1材料与方法　　1.1细胞株人膀胱癌细胞株5637购自美国ATCC细胞库。　　1.2主要试剂水飞蓟宾SB(C25H22O10·H2O)为美国Sigma公司产品，相对分子质量500.23；RPMI1

6、640培养液为GIBCO公司产品；胎牛血清为杭州四季清生物制品公司产品；四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)为美国Sigma公司产品；脱氧核苷三磷酸(dNTP)、RNA酶、聚合酶链反应(PCR)的相对分子质量标记(Marker)为日本TaKaRa公司产品；PCR引物由上海生工公司合成。　　SB的配制：SB由二甲基亚砜(DMSO)助溶，过滤除菌，试验时用RPMI1640培养液稀释。　　1.3细胞培养细胞株培养在含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液(内含1g/L青霉素+链霉素)，并置于37℃，50mL/LCO2培养箱内备

7、用。　　1.4MTT法检测SB对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用取对数生长期的人膀胱癌细胞株5637细胞，调整细胞浓度为5×104个/mL，取200μL接种于96孔培养板中。实验组SB的终浓度分别为0、25、50、100、200、400μmol/L。每种浓度设6个平行孔，于37℃，50mL/LCO2培养箱内分别培养24、48、72、96h后倾去培养液，每孔加入MTT溶液(5g/L)20μL继续孵4h，每孔加入150μLDMSO，振荡10min。最后于酶标仪490nm处测定各孔吸光度(A)值，重复6次，求平均值。设空白组作为测吸光度调零用。　

8、　细胞增殖抑制率=[对照组A值实验组A值]/对照组A值×100%　　1.5分组及浓度、时间选择设控制组(DMSO)、SB组。根据MTT结果，SB组选