survivin 基因在增殖性玻璃体视网膜病变增殖膜中的表达

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1、Survivin基因在增殖性玻璃体视网膜病变增殖膜中的表达作者：王俊艳，颜华，王世忠，李金茹，刘皓【关键词】Survivin基因；,,增殖性玻璃体视网膜病变；,,增殖膜　　摘要：目的：观察Survivin基因在增殖性玻璃体视网膜病变增殖膜中的表达。方法：取已确诊为PVR并行玻璃体切除术患者的PVR增殖膜，标本于术后立即由贮液瓶取至无菌器皿冰温运回，取出增殖膜放入多聚甲醛固定，并常规乙醇脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋、制备5μm连续切片，将切片行常规H-E染色，采用Survivin多克隆抗体（抗人及抗兔）行免疫组织化学实验，检测Survivin基因在玻璃

2、体和增殖膜中的表达。结果：Survivin基因在PVR增殖膜中呈阳性表达，且随着PVR临床分级的增高，免疫组织化学染色阳性细胞百分率逐渐升高。结论：认为PVR的形成是由于Survivin基因的异常表达促进了细胞增殖，阐明PVR的形成机制。　　关键词：Survivin基因；增殖性玻璃体视网膜病变；增殖膜　　ExpressionofSurvivinGeneinPeriretinalMembranesofProliferativeVitreoretinopathy　　Abstract：Objective:Tostudytheexpressionofsurv

3、ivingeneinperiretinalmembraneofprliferativevitreoretinopathy(PVR).Method:14periretinalmembranesobtainedfrom14casesofPVRentundergoingvitretomyinetheexpressionofsurvivinggenebySABCmethod.Result:Survivingeneandextracellularmatrix.Conclusion:Theabnormalexpressionofsurvivinggeneinhi

4、bitsapoptosisanditmayparticipateintheprogressionofproliferativevitreoretinopathy.　　Key连续切片，将切片行常规H-E染色，采用Survivin多克隆抗体，行免疫组织化学实验，检测Survivin基因在玻璃体和增殖膜中的表达。　　1.2方法：石蜡切片常规脱蜡至水，3%H2O237℃，30min，以阻断内源性过氧化物酶活性，正常兔血清湿盒内37℃封闭20min；滴加羊抗人survivin多克隆抗体，湿盒内4℃过夜，漂洗；滴加生物素化兔抗山羊IgG，湿盒内37℃，20min

5、，漂洗；滴加SABC复合物，湿盒内37℃，20min，漂洗；DAB显色，显微镜下观察，水洗中止反应；脱水，透明，封片。将已知的乳腺癌切片作为阳性对照，用磷酸缓冲液代替一抗作为隐性对照，以组织切片背景清晰、胞质或胞核染为淡黄至黄棕色者为阳性细胞标志。将阳性细胞按显色强度分为3级：表达弱阳性，即显色强度为淡黄色或仅个别细胞呈黄至棕黄色染色；表达强阳性，即多数细胞呈黄至棕黄色染色；表达中度阳性，即显色强度介于弱阳性与强阳性之间。凡显色强度与背景无明显差别者为阴性。　　2结果　　　　14例PVR增殖膜标本中，8例阳性，其中2例强阳性，4例中等阳性，2例弱阳性

6、。在PVR增殖膜的细胞中，视网膜色素上皮细胞（retinalpigmentepithelium,RPE）占较大部分，胞体变得长园，形态不规则。另外在增生膜中还见一些上皮细胞样和成纤维细胞样细胞。阳性染色位于膜上大部分细胞的胞质内，为棕黄色。阴性对照组中未见阳性染色。　　3讨论　　　　PVR是一种细胞增生过度而凋亡过低的疾病。细胞凋亡是多细胞有机体为控制机体发育，维护内环境稳定，由基因控制的细胞主动死亡。Survivin是一个近年来发现的凋亡蛋白抑制剂（inhibitorofapoptoticprotEin，IAP）家族成员，广泛表达于人的胚胎组织和各

7、种肿瘤组织，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能，是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子，几乎在所有被研究的肿瘤中均呈阳性表达。我们认为PVR虽然不同于肿瘤，但它在眼内局部发病情况与肿瘤的发病机理十分相似，均表现为细胞的过度增生。细胞的过度增生意味着细胞凋亡的减少，基于此，本实验从抑制细胞凋亡的Survivin基因着手，采用免疫组化技术，检测Survivin基因在PVR患者增殖膜中的表达，探讨其在PVR发病机制中的作用。为进一步通过反义核酸技术封闭Survivin基因，抑制玻璃体和视网膜细胞增生，在基因水平治疗PVR提供理论依据。　　参考