脂氧合酶在胃癌中的表达及其意义论文

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1、脂氧合酶在胃癌中的表达及其意义论文李建英，李勇，王小众，邹来玉，陈丰霖【摘要】目的检测5脂氧合酶(5lipoxygenase,5LOX)和15脂氧合酶1(15lipoxygenase1,15LOX1)mRNA及蛋白在胃癌及癌旁正常组织中的表达，并研究两者间的关系。方法采用RTPCR和RNA和蛋白的表达。结果5LOXmRNA及蛋白在胃癌组织中的表达均显著高于癌旁正常组织(P＜0.05)，而15LOX1mRNA及蛋白在胃癌组织中的表达均显著低于癌旁正常组织(P＜0.05)。5LOX与15LOX1在胃癌组织中的表达无明

2、显相关(P＞0.05)。结论胃癌组织中存在5LOX和15LOX1的表达失衡，且可能与胃癌的发生发展有关.freelRNA和蛋白表达，探讨二者在胃癌形成中的作用，为胃癌的有效治疗和预防提供新的思路。1材料与方法1.1材料收集30例2005年6月～2006年1月间外科手术切除胃癌组织及距肿瘤边缘5cm癌旁正常胃黏膜组织（经病理证实）。液氮保存用于做RTPCR及an公司（160704），兔抗绵羊二抗购于KPL公司。1.2方法1.2.1RTPCR检测RNA的提取按RNA提取试剂盒说明书规范操作提取组织总RNA，然后进行定量、检测纯度等。取RN

3、A样品2μg，42℃60min，99℃5min合成cDNA。5LOX基因上游引物:上游引物5＇CCCGGGGCATGGAGAGCA3＇，下游引物:5＇GCGGTGGGGCAGCGTGTC3＇；416bp。15LOX1基因上游引物:5＇GCTGGAAGAGAGAAGGAAGTTG3＇，下游引物：5＇GAAGTCAGCTTCGAACAGTGTG3＇，485bp。内参βactin基因上游引物：5＇CTATTGGCAACGAGCGGTTC3＇,下游引物：5＇CTTAGGAGTGGGGGTGGCTT3＇,776bp。取1μ

4、lcDNA进行PCR扩增（反应体系25μl）。5LOX基因扩增条件：94℃3min,94℃30s,63℃30s,72℃1min,32个循环；72℃7min。15LOX1基因扩增条件：94℃3min,94℃45s,57℃45s,72℃1min,.freelin。取8μlPCR产物,经1.2%琼脂糖凝胶（含0.5g/l溴化乙锭）电泳分离,紫外灯下观察结果。1.2.2MNaCl，50mMTris，1μg/ml亮肽素leupeptin，1μg/ml抑肽酶Aprotinin，1μg/ml抑肽素Pepstatin，0.1μg/ml苯甲基磺酸酰氟PMS

5、F)1000μl,充分混匀。4℃、12000g离心20min,收集上清。Bradford比色法测定蛋白浓度。每孔25μg蛋白上样,10%SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。蛋白印迹包括电转膜、5%脱脂奶粉封闭、TBST稀释的一抗4℃过夜(5LOX、15LOX1抗体浓度分别为1∶200、1∶1000)、二抗(1∶6000)室温轻摇60min,用化学发光试剂盒（北京中山生物技术有限公司）进行蛋白信号检测。βactin作为内对照。1.3统计学处理采用SPSS11.0统计分析软件进行χ2检验、Spearman’s等级相关检验。P0.05为有统计学差异。2

6、结果2.15LOX和15LOX1mRNA在胃癌组织与癌旁正常组织中的表达RTPCR产物电泳后观察，30例胃癌组织与癌旁正常组织中均可测到776bp的βactin，结果见表1、2，图1、2。2.25LOX和15LOX1蛋白在胃癌组织与癌旁正常组织中的表达在RNA的表达表2胃癌组织与癌旁正常组织中15LOX1mRNA的表达表3胃癌组织与癌旁正常组织中5LOX蛋白的表达表4胃癌组织与癌旁正常组织中15LOX1蛋白的表达由表5可见,两者蛋白水平表达无明显相关性（P＞0.05）。表5胃癌组织中5LOX蛋白和15LOX1蛋白

7、表达的相关性3讨论胃癌是起源于胃上皮的恶性肿瘤，是最常见的恶性肿瘤之一，尽管国内外对胃癌已做了大量的研究，但其病因和发病机制仍未阐明。我们知道，环氧合酶在胃癌形成过程中发挥着关键作用1,2，近年来更有报道表明环氧合酶抑制剂的抗肿瘤作用可能涉及脂氧合酶途径，提示脂氧合酶代谢途径在胃癌形成过程中可能扮演着更为重要的角色3。研究表明，脂氧合酶共可分为4型：5LOX、8LOX、12LOX、15LOX，其中15LOX可根据其组织分布的特异性分为两种同工酶15LOX1、15LOX246。目前有关5LOX的研究报道较多，发现5LOX及

8、其主要下游产物5HETE和LTB4在各种上皮来源的恶性肿瘤中高表达，例如结肠癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌和前列腺癌，5LOX抑制剂通过诱导凋亡抑制细胞