高效液相色谱法测定磷酸川芎嗪纳米脂质体中磷酸川芎嗪的含量论文

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1、高效液相色谱法测定磷酸川芎嗪纳米脂质体中磷酸川芎嗪的含量论文【摘要】目的建立HPLC法测定磷酸川芎嗪纳米脂质体中磷酸川芎嗪的含量。方法色谱柱为phenomenexLunaC18(2)100A(4.6mm×250mm,.freel)柱，phenomenex保护柱;流动相为甲醇-水(3∶2)；流速1.0ml/min；检测波长295nm；柱温为室温。结果磷酸川芎嗪与辅料及溶剂峰分离良好，在0.408~40.8μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9999)。结论该方法简便易行，准确可靠，可用于磷酸川芎嗪纳米脂质体的含量测定。【关键词】磷酸川芎嗪纳米脂质体高效液相

2、色谱Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofthecontentoftetramethylpyrazinephosphate(TMPP)inTMPPnanoliposome.MethodsTheconditionofHPLCenexLunaC18(2)100Acolumn(4.6mm×250mm,5μm),mobilephase:methanol/.Theflol/minandthecolumntemperaturetemperature.ResultsThereatograph

3、iccondition．Thecalibrationcurvel(r=0.9999).ConclusionThemethodissimpleandaccurate.Itcanbeusedforthedeterminationofcontentoftetramethylpyrazinephosphatenanoliposome．Keyethylpyrazinephosphate(TMPP);Nanoliposome;HPLC川芎嗪(Tetramethylpyrazine，TMP)是中药川芎中的主要活性生物碱，临床上广泛用于缺血性脑血管病的治疗。已上市的川芎嗪制剂主要

4、有磷酸川芎嗪(Tetramethylpyrazinephosphate，TMPP)片剂、胶囊剂和注射剂［1］。口服制剂生物利用度不高；注射剂给药不方便。有研究报道.freelmitP680型高效液相色谱仪，包括p682泵、UVD170U可变波长紫外检测器、Chromeceon色谱工作站，德国dionex公司；AUY220型电子天平，Shimadzu公司；phenomenexLunaC18(2)100A(4.6mm×250mm,5μm)柱，phenomenex保护柱，广州菲罗门科学仪器有限公司。1.2药品与试剂磷酸川芎嗪，批号：050814，广东丽珠集团利民制药

5、厂；大豆磷脂EPIKURON200，批号：1-5-9022（德国Degussa公司），北京百威昂医药技术开发有限公司提供；胆固醇，上海伯奥生物科技有限公司；聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX-100），上海凌峰化学试剂有限公司；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1磷酸川芎嗪纳米脂质体的制备采用pH梯度法制备。取磷脂、胆固醇等溶于有机溶剂中，减压蒸发除去有机溶剂，加入柠檬酸溶液水化，间歇式超声，滤过，得空白脂质体。加入适量TMPP，用碱性溶液将外相pH值调至近中性，定容，置水浴中温育，即得。2.2TMPP纳米脂质体破膜溶剂的选择为保证脂质体含量测定的

6、准确性，必需选用合适的溶剂系统使脂质体溶解，让药物从脂质体中完全释放出来。分别用甲醇、乙醇、异丙醇、TritonX-100醇溶液等溶剂单独或不同比例混合溶剂溶解脂质体溶液，结果5%TritonX-100醇溶液可溶解脂质体为澄清溶液，且得到的色谱峰峰形较好。因此，选其为破膜溶剂。2.3色谱条件色谱柱为phenomenexLunaC18(2)100A(4.6mm×250mm,5μm)柱，phenomenex保护柱；流动相为甲醇-水(3∶2)；流速1.0ml/min；检测波长295nm；柱温为室温。2.4方法专属性考察分别取TMPP溶液、空白脂质体用破膜溶剂溶解加水

7、稀释所得的溶液、TMPP纳米脂质体用破膜溶剂溶解加水稀释所得的溶液进样20μl，记录色谱图，结果辅料和溶剂对TMPP测定无干扰，TMPP保留时间约为5.2min。2.5线性关系考察精密称取TMPP适量，加水溶解制成含量为40.8μg/ml贮备溶液。精密量取上述溶液加水稀释成20.4，8.16，4.08，2.04，1.02，0.408μg/ml浓度溶液。精密吸取贮备溶液及上述溶液各20μl进样，以峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线，得回归方程：Y=0.3706X-0.04067，r=0.9999，表明TMPP在0.408~40.8μg/ml浓度范

8、围内线性关