叶下珠有效部位总提取物致突变实验研究论文

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1、叶下珠有效部位总提取物致突变实验研究论文【摘要】目的评价叶下珠有效部位总提取物的致突变性。方法采用微核实验、Ames实验和体外染色体畸变实验对叶下珠有效部位总提取物进行了诱变性检测。结果小鼠体内骨髓细胞微核实验未发现骨髓细胞微核率增加，Ames实验中对TA97，TA98，TA100，TA1024种菌株加与不加S9均未发现回变菌落数增加，体外染色体畸变实验加与不加S9均未发现染色体畸变率超过5%。3个实验结果均为阴性。结论在该实验条件下，未检出叶下珠有效部位总提取物的诱变性。【关键词】叶下珠有效部位总提取物诱变微

2、核实验小鼠体内骨髓细胞微核实验Ames实验体外染色体畸变实验StudyonMutagenicityofTotalExtractsofYexiazhu(TEY)Abstract：ObjectiveToevaluatethemutagenicityoftotalextractsofYexiazhu(TEY).MethodsThemicronucleustestinmice,Amestestandchromosomeaberrationtesticronucleusratesinalldosesthecontrolg

3、roup.Noincreaseinthenumberofrevertantcoloniesestest.NegativeresultschromosomeaberrationtestinCHLcell.ConclusionNomutagenicityeffectsofTEYice;Amestest;Chromosomeaberrationtest叶下珠有效部位总提取物的一般药理学研究，大鼠长期毒性实验均未发现对机体的毒性作用.freeles实验和体外染色体实验研究本品的诱变性。1材料1.1受试药物叶下珠有效部位

4、总提取物,四川省中药研究所提供。批号：930701。用蒸馏水溶解并配制成不同浓度的受试物液。1.2阳性对照物环磷酰胺(CP),.freelg/kg，一个阴性对照组（蒸馏水）和阳性对照组（环磷酰胺50mg/kg）。各组均按2%容积灌胃，1次/d，共4d。最后1次灌胃后24h处死小鼠，取胸骨骨髓涂片，固定后10%Giemsa液染色，采用双盲法油镜下每只动物观察1000个嗜多染红细胞（PCE），记录含微核的细胞数。计算微核率（‰），用χ2检验分析各受试组与阴性对照组微核率的差异性。同时观察并计算PCE/NCE（正染红

5、细胞）的比值。2.2鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶实验以TA97，TA98，TA100，TA1024种鼠伤寒沙门氏突变菌株进行加S9与不加S9的标准平板掺入法。叶下珠有效部位总提取物用蒸馏水溶解，设5000，500，50，5，0.5μg/皿5个剂量组，阳性药3-硝基9-芴酮（每皿0.5μg，-S9）、MMC（每皿0.5μg，-S9）、2-AF（每皿20μg，+S9）。每一剂量均做3个平行皿，试验重复1次。于每皿加底层培养基20～25ml，待凝固后，在平皿上做好标记。取融化并保温在45℃的上层培养基一管（3ml

6、），依次加入菌液0.1ml，受检物0.1ml，需S9时，加S9混合物0.5ml，充分混匀，然后铺倒在底层培养基上，并充分混匀，待上层凝固后，将平板翻转置37℃培养48h后观察结果。统计方法：使用《中国医学百科全书医学统计学》统计软件包（第2版），对结果进行方差分析，q检验。2.3CHL细胞染色体畸变实验2.3.10%生长抑制浓度（IC50）的测定采用台盼蓝染色法计数活细胞数，计算细胞相对存活率。细胞相对存活率(%)=（剂量组活细胞数/阴性对照组活细胞数）×100%。当相对存活率为50%时，所对应的剂量即为IC5

7、0。2.3.2实验步骤以CHL细胞进行加与不加S9的染色体畸变试验法。叶下珠有效部位总提取物样品用超纯水溶解并配制成不同浓度的受试物液，设100.00，50.00，25.00，12.50μg/ml和6.25μg/ml5个剂量组，同时设空白对照和阳性对照。阳性药为MMC（0.50μg/ml，作用24h，-S9；0.25μg/ml，作用48h，-S9）及CP（50.00μg/ml，±S9），每一剂量组均作两个平行样，实验重复1次。不加S9时，每个培养瓶加入含10%新生小牛血清的Eagle'sMEM培养液4.9ml，

8、受试物溶液0.1ml；加S9时，每个培养瓶加入含10%新生小牛血清的Eagle'sMEM培养液4.5ml，受试物溶液0.1ml，同时加入S9混合物0.4ml，充分混匀。不加S9的试验加受试物后24，48h分两批收获细胞；加S9的试验加受试物培养6h后，弃培养液，换不含受试物的新鲜培养液继续培养至24h收获细胞。常规用双盲法进行染色体畸形分析，每次实验每个剂量组至少观察100个中期分裂相