三磷酸腺苷对大鼠移植胰腺细胞死亡方式的影响论文

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1、三磷酸腺苷对大鼠移植胰腺细胞死亡方式的影响论文【摘要】目的研究三磷酸腺苷(ATP)对大鼠移植胰腺细胞死亡方式的影响，探讨ATP对大鼠移植胰腺缺血再灌注损伤的作用及相关机制。方法SD大鼠102只，随机分为假手术组、单纯移植组和ATP保护组，后2组按再灌注时间再各分为0、1、6、12h亚组，单纯移植组供体胰腺单纯用肝素平衡盐液进行低温(0～4℃)灌注并保存60min后行移植手术，ATP保护组供体胰腺用添加了ATP的肝素平衡盐液进行低温(0～4℃)灌注并保存60min后行移植手术。观察ATP对血糖、血清脂肪酶、淀粉酶

2、含量和胰腺组织病理学变化的影响，研究胰腺组织ATP含量与凋亡、胀亡细胞百分比的关系。结果ATP保护组胰腺组织病理损伤明显轻于单纯移植组，再灌注6、12hATP保护组血糖、血清淀粉酶、脂肪酶含量明显低于同时间点单纯移植组(血糖、脂肪酶.freelodelstoexploretheprotectivemechanismofATPagainsttheI/Rinjuryofthegraft.Methods102drug-induceddiabeticSDratsizedinto3groups:shamoperation

3、group,simpletransplantgroupandATPprotectiongroup.Thelattertepointsofreperfusionrespectivly.Theisolatedpancreasfromdonorratinbeforetransplantation.ATPasanadditiveagentpletransplantgroup.Bloodsugar，plasmaamylaseandlipaseconcentrations,andATPcontentinpancreatic

4、tissue,inedhistopathologicalstudylater.Thepercentagesofnormal,apoptotic,oncoticandnecroticcellsinedbyfloetry.ResultsItorphologicalchangesofpancreasinATPgroupuchmilderthanthoseinsimpletransplantgroup.Thebloodsugar，plasmaconcentrationsofamylaseandlipasepletran

5、splantsubgroups(P0.05,P0.01).ThetissueconcentrationofATPpletransplantgroup(P0.01).Thepercentageofoncoticcellspletransplantgroup(P0.01,.freelainlyapoptoticonesinATPgroup.ThetissueconcentrationofATPotetheinconvertibly-damagedcellstodieofapoptosisanddecreasethe

6、developmentofoncosis.Keyin后行移植手术，ATP保护组供体胰腺用添加了5mmol/LATP的肝素平衡盐液进行低温(0～4℃)灌注并保存60min后行移植手术。1.2动物模型制作采用张召辉、李玺［5］方法行大鼠胰十二指肠移植，建立大鼠移植胰腺I/RI模型。切除受体左肾，将供体带腹腔动脉和肠系膜上动脉的腹主动脉段与受体腹主动脉端侧吻合，供体门静脉与受体左肾静脉行端端吻合，供体的十二指肠远端与受体上段空肠作端侧吻合。1.3围术期处理实验前1周受体大鼠经阴茎背静脉按55mg/kg一次注入链脲霉素

7、(美国Sigma公司)制备空腹血糖≥16.8mmol/L的糖尿病模型。术前禁食不禁水24h，肌注氨苄青霉素(100mg/kg)预防感染。于设计时间点抽血后处死动物并切取胰腺行各项检查。1.4血糖、血清淀粉酶、脂肪酶检测血糖测定采用美国强生血糖仪，淀粉酶、脂肪酶测定采用日立7600-010型全自动生化仪。1.5组织病理学检查切取部分胰腺标本制成石蜡切片后行苏木精-伊红染色，每只动物取2张切片在光学显微镜下观察组织细胞形态学改变，采用Schmidt方法［6］由2位病理科医师进行双盲评分。1.6胰腺组织ATP含量测定

8、切取胰腺组织约0.5cm×0.5cm×0.5cm，应用岛津SCL-10AVP高效液相色谱仪以反相高效液相色谱法测定胰腺组织ATP含量。1.7凋亡和胀亡细胞百分比测定取胰腺组织1g，生理盐水洗净，剪碎，振荡后300目筛网过滤，收集细胞制成细胞悬液，调整细胞至1×109个/L，加标记有异硫氰酸荧光素的联结素V(AnnexinV－FITC，上海晶美生物工程有限公司)与碘化丙锭(PI，美国Si