尾加压素ⅱ促进乳鼠心肌成纤维细胞分泌胶原及增殖的细胞内信号转导机制

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1、尾加压素Ⅱ促进乳鼠心肌成纤维细胞分泌胶原及增殖的细胞内信号转导机制作者：宋庆刚，吕建庄，杨竞霄【摘要】目的探讨尾加压素Ⅱ(UⅡ)促进乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)分泌胶原及增殖的细胞内信号转导机制。方法体外培养CFs，采用免疫组织化学染色法及羟脯氨酸测定法分别观察不同浓度UⅡ作用下，CFs中磷酸化ERK1/2细胞灰度和CFs培养上清中胶原含量的变化；蛋白激酶C(PKC)抑制剂chelerythrinechloride(Che)、ERK1/2抑制剂PD98059和钙调神经磷酸酶(CaN)抑制剂cyclosporinA(CsA)各自对UⅡ诱导

2、的细胞增殖的影响。结果在1×10-10、1×10-9、1×10-8mol/LUⅡ作用下，CFs培养上清中胶原含量均较对照组明显增加，而CFs中磷酸化ERK1/2细胞灰度均较对照组有显著降低(P<0.01)；在1×10-7mol/LUⅡ作用下，上述各参数与对照组比较无统计学意义(P>0.05)。1×10-6mol/LChe+1×10-8mol/LUⅡ组、1×10-5mol/LPD98059+1×10-8mol/LUⅡ组和5μg/mLCsA+1×10-8mol/LUⅡ组的胶原含量均高于对照组而低于1×10-8mol/LUⅡ组(P

3、<0.05)。1×10-6mol/LChe+1×10-8mol/LUⅡ组、1×10-5mol/LPD98059+1×10-8mol/LUⅡ组和5μg/mLCsA+1×10-8mol/LUⅡ组的pERK1/2的灰度低于对照组(P<0.01)；1×10-6mol/LChe+1×108mol/LUⅡ组和5μg/mLCsA+1×10-8mol/LUⅡ组的pERK1/2的灰度高于1×10-8mol/LUⅡ组(P<0.01)，而1×10-5mol/LPD98059+1×10-8mol/LUⅡ组与之比较则无统计学意义(P>

4、;0.05)。结论UⅡ具有促进CFs分泌胶原及增殖的作用，其作用可能是通过PKC/MAPK/CaN途径实现的。【关键词】尾加压素Ⅱ；心肌；成纤维细胞；细胞分裂尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ，UⅡ)是一种生长抑素样环形结构的神经肽，最早提取于硬骨鱼的尾部下垂体，1998年首次在人体中克隆成功[1]。UⅡ广泛存在于神经系统和心血管系统，属于神经内分泌肽，其特异性受体为孤儿G蛋白耦连受体GPR14[24]。　　3讨论　　CFs不仅在心脏中数量最多，而且是主要合成和分泌心脏细胞外基质的细胞类型，而胶原是细胞外基质最主要的成分。CFs的增殖

5、和胶原合成的增加以及沉积导致心肌纤维化可能是左心室肥厚的主要病理基础。我们采用免疫扩散法可以观察到心肌组织、冠状动脉粥样硬化斑块中脂质沉积的平滑肌细胞和巨噬细胞聚集的区域中含有丰富的UⅡ。UⅡ不仅可以通过上调胆固醇乙酰转移酶1(ACAT1)而加速动脉粥样斑块中的巨核细胞源性泡沫细胞的形成[2,56]，还可以通过ERK途径促进脐静脉内皮细胞增殖和抑制细胞的凋亡，通过ERK途径和上调炎性因子刺激心肌细胞的肥大[78]。这在慢性心力衰竭的心肌重构方面起着重要的作用。另外，UⅡ还可以通过激活NADPH氧化酶，促进肺动脉平滑肌细胞的增殖，

6、从而导致肺动脉高压[9]。但是，UⅡ是否能促进CFs增殖以及其有关信号转导机制，目前尚不十分清楚。本研究结果显示，CFs的pERK1/2的灰度在10-10-10-8mol/LUⅡ之间呈浓度依赖性降低，灰度与免疫组化染色的深浅(pERK1/2的含量多少)呈相反趋势。由此可见，CFs的pERK1/2的含量在10-10-10-8mol/L之间呈浓度依赖性增加，表明UⅡ可使pERK1/2表达增加。pERK1/2为MAPK的一种类型，主要作用是介导细胞的增殖和肥大[1011]。在10-10-10-8mol/LUⅡ作用下，随着UⅡ干预浓

7、度的增加，CFs培养上清中的胶原含量均较对照组的胶原含量明显增加，具有统计学意义。以上两点都明确提示UⅡ具有促使CFs增殖和胶原合成的作用。而在10-7mol/LUⅡ组，CFs培养上清中的胶原含量和pERK1/2灰度与对照组相比则无统计学意义，说明随着UⅡ浓度的增加，UⅡ促CFs增殖及胶原合成作用减弱。有人在大鼠主动脉缩窄后压力超负荷的心肌肥大模型和大鼠主动脉内膜球囊拉伤后再狭窄模型上发现，心肌浆膜及主动脉内膜的UⅡ受体结合位点上调，而且UⅡ引起血管收缩反应增强[1213]。有研究表明，高血压病患者的血浆中UⅡ含量升高[14]。由此

8、推测UⅡ促CFs细胞增殖的机制可能是：当血浆中的UⅡ含量升高时，CFs细胞膜上的受体结合位点上调，从而使UⅡ的作用加强；当血浆中的UⅡ含量进一步升高时，受体却产生了耐受性而下调，最后使UⅡ的促增殖作用减弱。