慢性马兜铃酸肾病大鼠模型肾组织中蛋白质组的差异表达

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1、慢性马兜铃酸肾病大鼠模型肾组织中蛋白质组的差异表达作者：孙世仁，陈光磊，宁晓暄,陈威【关键词】马兜铃酸；大鼠；肾组织；双向聚丙烯酰胺凝胶电泳；蛋白质组　　DifferentiallyexpressedprotEinsinrenaltissuesofratmodelsofchronicaristolochicacidnephropathy　　【Abstract】AIM:Toestablishthe2dimensionalpolyacrylamidegelelectrophoresis(2DPAGE)profilesfromaristolochicacidnephropathy(AA

2、N)ratrenaltissuesandnormalrenaltissuesandtoidentifythedifferentiallyexpressedprotEIns.METHODS:EstablishchronicrenalinterstitialfibrosismodelinratsbyperitonealinjectionAANmodelsandnormalratrenaltissuesapsageanalysissoftodelsofAAinducedchronicrenalinterstitialfibrosisodelsandnormalratrenaltissu

3、esanydifferentiallyexpressedproteinsaybemediatethetoxicityofaristolochicacidtorenaltissues.　　【Keye　　【摘要】目的：制备慢性马兜铃酸肾病的大鼠模型，建立马兜铃酸肾病大鼠肾组织和正常大鼠肾组织的双向电泳图谱，从而展示差异表达的蛋白质，为进一步筛选介导马兜铃酸毒性作用的蛋白质分子奠定基础.方法：应用马兜铃酸腹腔注射制备大鼠慢性马兜铃酸肾病模型，提取其肾组织中总蛋白质，采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对模型组和正常组肾组织中蛋白质进行差异展示.结果：成功制备了慢性马兜铃酸肾病大鼠模型，并建

4、立了模型组和正常组大鼠肾组织的双向电泳图谱，发现了差异蛋白质.结论：马兜铃酸导致大鼠肾组织中蛋白质差异表达，这些差异表达的蛋白质可能介导了马兜铃酸的毒性作用.　　【关键词】马兜铃酸；大鼠；肾组织；双向聚丙烯酰胺凝胶电泳；蛋白质组　　【中图号】R587.1　　0引言　　自Vanhr等［1］报道了因减肥药引起“中草药肾病（Chineseherbsnephropathy，CHN）”以来，含马兜铃酸成分的中草药所致的肾损害马兜铃酸肾病（aristolochicacidnephropathy，AAN）越来越受到了国内外学者的广泛重视.由于一些常用中草药及中成药都含有马兜铃酸，因而由马兜铃酸

5、引起的肾损害在临床上十分常见［2］.急性AAN主要表现为急性肾小管坏死，慢性AAN表现为寡细胞性肾间质纤维化［2-3］，病情多为不可逆性，而且即使停服药物，其肾损害仍然继续进展［4-5］.绝大多数患者很快或逐渐进入终末期肾衰，需要肾脏替代治疗.因此阐明马兜铃酸肾损害的分子机制，以进行早期的诊断和治疗（在蛋白质或基因水平进行干预和阻断）将是缓解马兜铃酸肾损害的关键.为此，我们建立慢性马兜铃酸肾病模型，用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选和比较马兜铃酸诱导的差异蛋白质分子，为马兜铃酸导致肾损害的分子靶点研究奠定基础.　　1材料和方法　　1.1材料雌性Wistar大鼠，20～24g/(kg&#

6、12539;d)，共16L/d，共16.　　1.2.3双向电泳（2DPAGE）首先进行等电聚焦(IEF)：取17cmIPG胶条(pH5～8)在加有样品的泡涨液中以被动式泡涨12～16h，用PROTEANIEFCell等点聚焦仪进行第一向电泳.IEF结束后，IPG胶条置含有DTF的平衡液中；然后进行SDSPAGE电泳：预先制备垂直电泳用凝胶，将进行完IEF并平衡后的胶条转移至凝胶的上方，用10g/L热琼脂糖溶胶封固.在PROTEANIIXi垂直电泳槽的上下槽中加入电极缓冲液后按照预设程序进行电泳，直至溴酚蓝前沿距下缘0.5cm时停止电泳.最后参照BioRad推荐的硝酸银染色方法进行

7、染色.凝胶通过Imagescanner扫描仪以及LabScan扫描软件进行扫描获取图像，利用PDQUEST图像分析软件对电泳结果进行分析，图像分析包括蛋白质斑点的检测、编辑、背景扣除和点的匹配等.　　统计学处理：所有数据的统计分析在SPSS10.0软件和Excel上进行.　　2结果　　2.1慢性马兜铃酸肾病模型的鉴定马兜铃酸组用药后8JL,DepierreuxM,TielemansC,etal.Rapidlyprogressiveinterstitialrenalfibrosis