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1、肺气虚证模型大鼠肾组织钠离子转运相关蛋白表达变化研究论文.freelodelrats.MethodsLung-QideficiencymodelofratsmunohistochemistryeasuretheexpressionsofENaCandrBSClinrenaltubularepithelium.RIAaandlungtissue.Resultsparedarkedly,ALDlevelincreasedandANPleveldecreasedobviouslyinthemodelgroup.ConclusionLungcanregulatethee
2、xpressionsofENaCandrBSClintherenaltubulebysecretingALDandANP,etabolismofthebody.Keyodel;ENaC;rBSCl;ALD;ANP;rat中医学理论认为,.freel3的烟室中,香烟(焦油量为12mg,烟气烟碱量为1.1mg)烟熏,每日30min;自由进食、饮水。对照组：将每只大鼠于第1、14日气管内注入0.9%氯化钠注射液200?L;于第2～13、15～28日,置于无烟熏同样环境中饲养。1.3观察指标1.3.1一般状况及肺组织病理变化观察各组大鼠活动量、皮毛、食量、呼吸、咳嗽、大
3、便等情况,以反映气虚的有无和程度的轻重。并于造模28d后用10%水合氯醛3mL/kg体重腹腔麻醉后,取左肺下叶,常规石蜡切片、HE染色,光镜观察肺组织变化。1.3.2血浆中醛固酮、心钠素的检测于造模28d后用10%水合氯醛3mL/kg体重腹腔麻醉后,从大鼠腹主动脉取血5mL,分别注入空白试管中及加肝素的试管中,静置30min,4℃3000r/min离心10min,分离血清,-70℃保存。采用放射免疫分析技术检测血浆醛固酮(ALD)、心房钠尿素(ANP)含量,按试剂盒说明书操作。放射免疫检测在中国医科大学核医学室完成。1.3.3检测肾组织钠离子转运相关蛋白表达采用
4、免疫组化方法检测,应用常规手术方法进行动物放血后,立即剪开胸、腹腔取出右肾,将肾组织用4%多聚甲醛溶液固定,石蜡包埋,连续切片,片厚5?m。按试剂盒操作,检测肾小管上皮性Na+通道(ENaC)及Na+-K+-2Cl-转运体(rBSCl),以细胞膜或细胞浆内出现清晰棕褐色颗粒为阳性。对免疫组化的结果进行分析：将每只动物随机取相同部位3～4张切片置于显微镜下,使用BI2000医学图象分析系统测定阳性反应物的灰度值。1.4统计学方法采用SPSS10.0统计学软件进行数据处理,P0.05为差异有统计学意义,实验数据均以—(—数)±s表示,组间比较采用t检验。2结果2.1
5、肺气虚证模型大鼠一般状态的变化对照组大鼠活泼好动,皮毛光泽,饮食自如,体重逐渐增加,呼吸平稳,口鼻清洁红润、体重稳步增长。模型组大鼠先后出现咳嗽、气急、喘鸣、鼻部潮湿微红、精神萎靡、行动迟缓、蜷伏不动、毛失光泽并有脱落等症状,同时食量逐渐减少,大便变软变稀,体重进行性减少。肉眼所见：对照组大鼠两肺体积正常,粉红色,弹性好,无异常改变;模型组大鼠两肺呈膨胀状态,体积增大,边缘变钝,颜色变白,肺表面可见小囊泡状突起,可见少量渗出液。光镜所见：对照组支气管、肺泡匀无异常所见;模型组大鼠气管、支气管及肺泡有明显炎细胞浸润;管腔狭窄,肺泡膨大,泡壁变薄,呈肺气肿表现;血管
6、扩张充血,局部肺泡腔内可见水肿液。综合上述,符合肺气虚造模标准。尿量及尿比重变化见表1。表1肺气虚证模型大鼠尿量、尿比重的变化(—(—虚)±s)注：与对照组比较,**P0.01(下同)2.2肺气虚证模型大鼠肾小管上皮性Na+通道及Na+-K+-2Cl-转运体表达变化光镜下观察发现,肾组织ENaC表达部位多沿着肾小管管壁周围分布,特别在肾近曲小管管壁周围最为密集,并呈现棕黄色;rBSCl的表达部位主要在肾远曲小管处分布比较密集,其颜色也以棕黄色为主。与对照组比较,模型组肾小管周围分布的rBSCl和ENaC均明显增加,2组灰度值差异有统计学意义(P0.05)。见表2
7、。表2肺气虚证模型大鼠肾小管ENaC与rBSCl蛋白表达变化(—(—达)±s,灰度值)2.3肺气虚证模型大鼠血浆与肺组织中醛固酮与心钠素含量变化(见表3)表3肺气虚证模型大鼠血浆及肺组织匀浆中ALD与ANP含量变化3讨论现代医学认为,影响全身水盐代谢最重要的器官是肾脏,调节机体水盐代谢、维持电解质平衡等其关键在于肾小管和集合管选择性重吸收功能,而Na+的转运是带动和促进肾小管和集合管对各种物质的重吸收最重要的离子,ENaC以及rBSCl均为Na+转运的主要通道蛋白与转运子,前者大部分沿着肾小管管腔膜分布,ENaC表达量直接调控着Na+重吸收,进而影响水和Cl-的
8、重吸收;而后者则主要分布
