资源描述：
《成骨细胞特异性表达cre重组酶转基因小鼠的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、HEREDITAS(Beijing)2007年10月,29(10):1237―1242ISSN0253-9772www.chinagene.cn研究报告DOI:10.1360/yc-007-1237成骨细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立程萱,翁土军,谭晓红,侯宁,王健,林福玉,黄培堂,杨晓军事医学科学院生物工程研究所,北京100071摘要:构建了含有骨钙素基因启动子、Cre重组酶基因和人生长激素基因polyA的转基因载体pOC-Cre,以显微注射的方法将4.6kb的转基因片段OC-Cre导入小鼠受精卵。16只子代小鼠中经PCR和Southern杂交鉴定,有2只小鼠
2、携带外源基因,整合率为12.5%。为了检测OC-Cre在转基因小鼠中表达的组织特异性,将转基因首建者小鼠与基因组上携带有LoxP位点的条件性Smad4基因敲除小鼠交配,PCR结果显示,仅在子代纯合型小鼠骨组织基因组中扩增出了Cre介导重组后的片段。将OC-Cre转基因小鼠与ROSA26报告小鼠交配,利用LacZ染色对双转基因阳性子代小鼠进行检测,结果显示Cre重组酶在成骨细胞中特异性表达并介导ROSA基因座LoxP位点间的重组。所有这些结果说明：所建立的OC-Cre转基因小鼠在成骨细胞中特异性表达Cre重组酶,并能在体内介导成骨细胞基因组上LoxP位点间的重组,是一种理想
3、的研制成骨细胞特异性基因敲除小鼠的工具小鼠。关键词:Cre;转基因小鼠;成骨细胞;显微注射Establishmentofosteoblast-specificCretransgenicmiceCHENGXuan,WENGTu-Jun,TANXiao-Hong,HOUNing,WANGJian,LINFu-Yu,
HUANGPei-Tang,YANGXiaoGeneticLaboratoryofDevelopmentandDiseases,BeijingInstituteofBiotechnology,Beijing100071,ChinaAbstract:Anosteob
4、last-specificCretransgenicconstruct(pOC-Cre)containingtheosteocalcinpromoter,Crerecombi-nasegeneandpolyAofhumangrowthhormonegenewasgenerated.The4.6kbDNAfragmentofOC-Crewasintroducedintofertilizedzygotesbymicroinjection.2outof16offspringwereidentifiedasfounderscarryingthetransgenebyPCRandS
5、outhernblotanalysis,andtheintegrationefficiencyis12.5%.TocheckthetissuedistributionoftheOC-Cre,theOC-CretransgenicfoundermicewerebredwiththemicecarryingSmad4conditionalalleles.PCRresultsshowedthatthegenomicDNAfragmentsafterCremediatedrecombinationcouldbeonlyamplifiedfrombonetissuesofthetr
6、ansgenicmice.LacZstainingofOC-Cre;ROSA26doubletransgenicmicerevealedthatCrerecombinaseexpressedinosteoblastsandmediatedDNArecombinationbetweenLoxPsitesattheROSA26locus.AllthesedataindicatedthattheCrerecombi-nasewasexpressedintheosteoblastsoftheOC-CretransgenicmiceandcouldmediateDNArecombi
7、nationbetweenLoxPsites.TheOC-Cretransgenicmicewegeneratedinthisstudycouldserveasausefultoolforgeneratingosteoblastspecificgene-knockoutmice.收稿日期:2007−03−24;修回日期:2007−05−23基金项目:国家重点基础研究发展计划(973计划)(编号：2005CB522506;2006CB943501)、国家自然科学基金重点项目(编号：30430350)、国家高技术研究发展计划项目(
