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1、大鼠肝癌细胞表面特标记与成瘤能力有关论文【关键词】,肝肿瘤Relationshipbetarkerscharacteristicandtumorigenicabilityinrathepatocarcinomacells【Abstract】AIM:Tostudytherelationshipbetarkerscharacteristicandtumorigenicabilityinrathepatocarcinomacells.METHODS:Theprimarylivercarcinomainratsine.Tumorcells
2、from8ratsarylivercarcinomaarkerssuchasCD34,cKit,Thy1,AFP,CK7,CK8,CK14,CK18,CK19andGGT.Thetumorinnuderatsacells(10OVCmarkernegativeorpositivecells)for1monthacells,orafterinjectedtonuderats,origenicabilityofthesesubpopulationsinaloorsinnuderatsthatofonesoracellshadadiff
3、erentabilitytocausetumorinrats.AFP(+)andCK7(-)maybethemarkerscharacteristicofhepatocarcinomastemcells.【Keys;stemcells;surfacemarkers【摘要】目的：研究大鼠肝癌细胞表面标记特征与成瘤能力关系.方法：二乙基亚硝胺为诱癌剂制造大鼠肝癌模型，分离培养肿瘤细胞，按照卵圆细胞表面标记（CD34,cKit,Thy1,AFP，CK7，CK8,CK14,CK18,CK19和GGT）分选肿瘤细胞，比较各个表面标记阳性肿瘤
4、细胞亚群与阴性肿瘤细胞亚群移植裸鼠后成瘤能力差异，并且对数稀释成瘤能力强的细胞亚群，分析低密度下强成瘤能力细胞亚群与相应阴性细胞亚群成瘤差异.结果：CD34,Thy1,CK7,CK8,AFP和GGT等6个标记的阳性与阴性肿瘤细胞移植裸鼠后.freelorstemcells,TSC)是近年肿瘤科学研究的热点.TSC来源于相应的成体干细胞，是肿瘤发生、扩散与转移的基础［1-3］.目前肝癌干细胞的研究报道很少.我们知道，卵圆细胞（ovalcells,OVC）不仅具备基本的肝干细胞性质，而且与肝癌发生关系密切，是最接近肝癌干细胞的成体干细
5、胞.我们通过OVC表面标记分选肝癌肿瘤细胞，了解不同肝癌细胞亚群的裸鼠成瘤能力，探索肝癌干细胞的表面标记特征.1材料和方法1.1材料雄性清洁级SD大鼠8只，8a公司产品;一抗CD34,cKit,Thy1,AFP,CK7,CK8,CK14,CK18,CK19和GGT购自北京中杉金桥生物技术有限公司.1.2方法以二乙基亚硝胺为诱癌剂，70mg/kg加入饲料中，每周1次，室温25~28℃.诱癌至12m3，置于含青霉素的无菌RPMI1640培养液中，用生理盐水漂洗2次，剪碎，放入2.5g/L胰蛋白酶消化液.细胞消化液经200目细胞筛过滤，
6、用完全培养液制成单细胞悬液常规培养.采用OVC10个表面标记物（CD34，cKit，Thy1，AFP，CK7，CK8，CK14，CK18，CK19和GGT）作为分选肿瘤细胞的特征标记.亲和板结合分离法分选肿瘤细胞.①将100μL纯化的羊抗鼠IgG加入到无菌塑料平皿中，再加缓冲液3mL混匀，4℃过夜，次日吸弃上清液，PBS洗去多余的抗体，含10mL/L小牛血清PBS室温下孵育，PBS洗3次，4℃保存备用.②取肿瘤细胞，每1×106个细胞加入各OVC表面标记工作液100μL,4℃作用1h,培养液悬浮细胞，(1.5~2)×107个加入到
7、上面准备好的塑料平皿中，Hanks液稀释为3mL,轻轻摇匀，4℃1h（20min摇1次）.取悬液中细胞标记为阴性细胞，洗脱黏附在塑料平皿的肿瘤细胞，标记为阳性细胞，继续常规培养.调整肿瘤细胞（阳性细胞或阴性细胞）密度为5×1010／L，取0.2mL细胞悬液注射到裸鼠腋背部皮下，观察裸鼠移植肿瘤生长情况，1mo裸鼠移植肿瘤测质量.对致瘤能力强的肿瘤亚群进行对数稀释（1/100或1/10）后，取0.2mL细胞悬液注射到裸鼠腋背部皮下，1mo测量移植肿瘤质量，了解强致瘤肿瘤细胞亚群低细胞密度下致瘤能力.统计学处理：各组肝癌细胞亚群成瘤能
8、力以肿瘤细胞移植裸鼠后形成肿瘤质量表示，均通过SPSS10.0软件进行配对t检验.P0.05为差异有统计学意义.2结果CD34，Thy1，CK7，CK8，AFP和GGT等6个标记的阳性与阴性肿瘤细胞移植裸鼠1mo后，成瘤能力差异显著(P0.05)，
