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1、大鼠肝癌细胞表面特标记与成瘤能力有关【关键词】,肝肿瘤Relationshipbetarkerscharacteristicandtumorigenicabilityinrathepatocarcinomacells 【Abstract】AIM:Tostudytherelationshipbetarkerscharacteristicandtumorigenicabilityinrathepatocarcinomacells.METHODS:Theprimarylivercarcinomainratsine.Tumorcellsfrom8ratsaryliver
2、carcinomaarkerssuchasCD34,cKit,Thy1,AFP,CK7,CK8,CK14,CK18,CK19andGGT.Thetumorinnuderatsacells(10OVCmarkernegativeorpositivecells)for1monthacells,orafterinjectedtonuderats,origenicabilityofthesesubpopulationsinaloorsinnuderatsthatofonesoracellshadadifferentabilitytocausetumorinrats.AFP
3、(+)andCK7(-)maybethemarkerscharacteristicofhepatocarcinomastemcells. 【Keys;stemcells;surfacemarkers 【摘要】目的：研究大鼠肝癌细胞表面标记特征与成瘤能力关系.方法：二乙基亚硝胺为诱癌剂制造大鼠肝癌模型，分离培养肿瘤细胞，按照卵圆细胞表面标记（CD34,cKit,Thy1,AFP，CK7，CK8,CK14,CK18,CK19和GGT）分选肿瘤细胞，比较各个表面标记阳性肿瘤细胞亚群与阴性肿瘤细胞亚群移植裸鼠后成瘤能力差异，并且对数稀释成瘤能力强的细胞亚群，分析低密度
4、下强成瘤能力细胞亚群与相应阴性细胞亚群成瘤差异.结果：CD34,Thy1,CK7,CK8,AFP和GGT等6个标记的阳性与阴性肿瘤细胞移植裸鼠后，成瘤能力差异显著(P<0.05或0.01)；1/100~1/10细胞密度的CK7阴性与AFP阳性细胞亚群成瘤能力仍然比其对应细胞亚群为高.结论：大鼠原发性肝癌肿瘤细胞中存在成瘤能力差异巨大的肿瘤细胞亚群.CK7(-)和AFP(+)，可能是大鼠肝癌干细胞的部分表面标记特征. 【关键词】肝肿瘤；干细胞；表面标记 0引言 肿瘤干细胞(tumorstemcells,TSC)是近年肿瘤科学研究的热点.TSC来源于相应的
5、成体干细胞，是肿瘤发生、扩散与转移的基础［1-3］.目前肝癌干细胞的研究报道很少.我们知道，卵圆细胞（ovalcells,OVC）不仅具备基本的肝干细胞性质，而且与肝癌发生关系密切，是最接近肝癌干细胞的成体干细胞.我们通过OVC表面标记分选肝癌肿瘤细胞，了解不同肝癌细胞亚群的裸鼠成瘤能力，探索肝癌干细胞的表面标记特征. 1材料和方法 1.1材料雄性清洁级SD大鼠8只，8a公司产品;一抗CD34,cKit,Thy1,AFP,CK7,CK8,CK14,CK18,CK19和GGT购自北京中杉金桥生物技术有限公司. 1.2方法以二乙基亚硝胺为诱癌剂，70mg/kg加
6、入饲料中，每周1次，室温25~28℃.诱癌至12m3，置于含青霉素的无菌RPMI1640培养液中，用生理盐水漂洗2次，剪碎，放入2.5g/L胰蛋白酶消化液.细胞消化液经200目细胞筛过滤，用完全培养液制成单细胞悬液常规培养.采用OVC10个表面标记物（CD34，cKit，Thy1，AFP，CK7，CK8，CK14，CK18，CK19和GGT）作为分选肿瘤细胞的特征标记.亲和板结合分离法分选肿瘤细胞.①将100μL纯化的羊抗鼠IgG加入到无菌塑料平皿中，再加缓冲液3mL混匀，4℃过夜，次日吸弃上清液，PBS洗去多余的抗体，含10mL/L小牛血清PBS室温下孵育，PB
7、S洗3次，4℃保存备用.②取肿瘤细胞，每1×106个细胞加入各OVC表面标记工作液100μL,4℃作用1h,培养液悬浮细胞，(1.5~2)×107个加入到上面准备好的塑料平皿中，Hanks液稀释为3mL,轻轻摇匀，4℃1h（20min摇1次）.取悬液中细胞标记为阴性细胞，洗脱黏附在塑料平皿的肿瘤细胞，标记为阳性细胞，继续常规培养.调整肿瘤细胞（阳性细胞或阴性细胞）密度为5×1010／L，取0.2mL细胞悬液注射到裸鼠腋背部皮下，观察裸鼠移植肿瘤生长情况，1mo裸鼠移植肿瘤测质量.对致瘤能力强的肿瘤亚群进行对数稀释（1/100或1/10）后，取0.2mL细胞悬液注射
8、到裸鼠腋背
