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1、初探五味子提取物体外抑菌作用ok3g/ml,大肠埃希氏菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌为31.3mg/ml;二倍稀释法的结果类似,除金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml外,其余3种菌均为25mg/ml。另外,五味子提取物经短时间的高温处理,仍具有较强的抑菌作用。[结论]五味子乙醇提取物具有明显的抑菌作用,且其抑菌成分是热稳定的。【关键词】五味子提取物抑菌作用五味子[Schisandrachinensis(Turcz.)Baill]别名北五味子、辽五味子、山花椒、乌梅子、软枣子等,为木兰科五味子属植物。多年生落叶
2、木质藤本,以野生为主,为常用中药材。主要以果实入药,因有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名,有敛肺、滋肾、止汗、生津、止泻、涩精等功能。可以治疗咳嗽、哮喘、口渴自汗、盗汗、遗精、久泻、神经衰弱等症,也是很好的果酒和饮料的原料[1],具有极高的药用价值和营养价值,是一种新型的“药食同源”功能性保健食品,其果实在国际上已成为一种新兴食品工业的重要原料[2,3]。本实验采用滤纸片法和二倍稀释法,研究了五味子提取物对4种常见污染菌的抑制作用,为其进一步开发利用提供依据。1资料与方法1.1菌种与培养基试验菌为金黄色葡萄球菌、
3、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯氏菌,由浙江省台州医院微生物实验室友情赠送。牛肉膏蛋白胨培养基按文献[4]自制,PH为6.0(用PBS配制[5])。1.2五味子提取物的制备五味子饮片购自临海市医药有限公司,经70℃烘干后研成粉末。取粉末10g用75%乙醇在超声波清洗器中提取,反复多次,直至浸出液色淡。将浸出液浓缩,并定容到10ml,即1ml提取液为1g五味子的提取物[6]。提取液过0.22μm滤膜除菌,4℃贮存备用。1.3抑菌试验1.3.1抑菌效力的测定将供试菌从斜面转接到5ml液体培养基,30℃培养24h
4、,吸取50μl到5ml液体培养基,30℃培养6h后取100μl菌液均匀涂布到平板上;再贴上滤纸圆片(φ6mm,提取液浸24h后风干),每皿4片,重复3次。37℃倒置培养24h后测定抑菌圈大小,用无菌水作空白对照,确定抑菌效果。1.3.2最低抑菌浓度(MIC)的测定采用二倍稀释法[7]测定提取物对供试菌的MIC。取7支试管,第1支加入10ml提取液,其余6支各加入5ml无菌水,从第1支吸取5ml提取液移至第2支,混匀后,再吸取5ml至第3支,以此类推,最后1支试管取出5ml弃去,每一试管的浓度分别为1000、5
5、00、250、125、62.5、31.3和15.6mg/ml。分别将5ml上述各浓度的提取物与20ml牛肉膏固体培养基混匀,制成提取物的浓度分别为200、100、50、25、12.5、6.3和3.2mg/ml(in,再制成浓度为500mg/ml的提取液浸泡滤纸片,稍风干后贴在涂有菌液的平板中,测定其抑菌效果。2结果与分析2.1提取物浓度对抑菌效力的影响滤纸片法测定结果(见表1)显示,五味子提取物对4种供试菌的生长均有很强的抑制作用,其中对绿脓杆菌的抑制作用最强,肺炎克雷伯氏菌其次,大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最弱
6、。表1五味子提取物的浓度对抑菌效率的影响(略)2.2不同菌的MIC提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌的MIC值如表2所示。除金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml外,其余3种菌均为25mg/ml(与滤纸片法基本一致)。表2五味子提取物的MIC(mg/ml)(略)“-”表示无菌生长,“+”表示细菌生长2.3提取物的热稳定性试验提取物经3种温度的热处理20min后,仍具有较强的抑菌效力,其抑菌圈直径与未经高温处理的样品接近,其中只有对绿脓杆菌抑制作用,经100℃处理和湿热灭菌后有显着下降,
7、对金黄色葡萄球菌的抑制作用,经湿热灭菌后有显着降低;而对大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌抑制作用,3种处理与对照均无显着差异(见表3)。说明五味子的抑菌成分具有一定的热稳定性。表3热处理对五味子提取物抑菌效力的影响(略)不同字母表示P<0.05水平显着,ns为不显着3结论经反复实验,结果表明五味子提取物的浓度在31.3~1000mg/ml范围内,对4种供试菌的抑制效应依次为:绿脓杆菌>肺炎克雷伯氏菌>大肠杆菌>金黄色葡萄球菌。滤纸片琼脂扩散法结果显示,除金黄色葡萄球菌MIC为62.5mg/ml
8、外,其余3种供试菌MIC均为31.3mg/ml;采用二倍稀释法测得的MIC也显示类似的结果,金黄色葡萄球菌的MIC为50mg/ml,另3种菌的MIC均为25mg/ml。另外,五味子提取物经短时高温处理后,其活性成分不变,仍保持较强的抑菌效果。【
