玉郎伞多糖的分离纯化和组成性质研究

《玉郎伞多糖的分离纯化和组成性质研究 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、玉郎伞多糖的分离纯化和组成性质研究林兴蒋伟哲焦杨张士军李江黄仁彬【摘要】目的从玉郎伞(YLS)中分离出玉郎伞多糖，并对其化学组成进行研究。方法YLS经醇提后的药渣用热水提取，乙醇沉淀，Sevag试剂脱蛋白，采用DEAE纤维素（DEAE52）柱层析分离纯化，气相色谱和薄层色谱分析其组成。结果分离得到的YLS多糖经Sephadex75凝胶柱层析，硫酸-苯酚法以及高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)证实为单一多糖，紫外扫描显示无核酸和蛋白特征吸收峰，薄层色谱和气相色谱表明由葡萄糖和阿拉伯糖组成。结论YLS多糖首次从YLS中提取获得，为YLS主要成分之一。【关键词】玉郎伞多糖

2、分离纯化组成玉郎伞（YLS）　　原植物经考证为蝶形花科植物疏叶崖豆MillettiapulchraKurzvarlaxior(Dunn)Z.DA含量，具有较好的抗衰老作用〔1〕。本实验对YLS多糖作了分离纯化并对其组成性质进行研究。现报道如下。1材料与仪器1.1材料与试剂玉郎伞饮片，购于南宁医药公司；D木糖，生化试剂，上海伯奥生物科技有限公司，批号011130；L（＋）－鼠李糖，生化试剂，北京化学试剂公司，批号011204；阿拉伯糖，生化试剂，武汉生命技术有限公司，批号030625；葡萄糖，分析纯，上海伯奥生物科技有限公司，批号030305；D（＋）半乳糖，生化试

3、剂，sigma，批号B002211。DEAECellulose52,an批号010410；SephadexG75，pharmacia,　批号：279867；胰蛋白酶，美国sigma，批号030409。用于气相色谱分析的试剂均为色谱纯，其余试剂为分析纯。1.2仪器1525m×26mm）柱层析，用蒸馏水洗脱，流速1ml·min-1，分部收集，每管5ml，用硫酸苯酚法显色〔3，4〕，收集合并含糖洗脱液，用旋转蒸发仪蒸干洗脱液，得白色YLS多糖。2.3多糖的纯度鉴定紫外光谱：取上述分离纯化后的多糖，配成0.1%水溶液，在TU1800SpC紫外可见分光光度计对200～

4、400nm区间扫描。凝胶柱层析：YLS多糖经SephadexG75柱层析，蒸馏水洗脱，流速0.1ml/min，每管1ml分部收集，苯酚硫酸显色，以管号为横坐标，光密度为纵坐标，根据分部收集中出现的峰数和形状断定多糖的纯度。高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)〔5〕：美国m×7.8mm)，流动相为0.7%硫酸钠水溶液，流速0.6ml·min-1，柱温35℃，进样量20μl。2.4多糖的组成分析薄层色谱分析〔6，7〕：　将60mgYLS多糖加入8ml2mol·l-1的硫酸中，加入N2除O2封管，105℃烘箱中水解8h，水解液用饱和Ba(OH)2溶液中和，离心去除BaSO4

5、沉淀，上清液减压浓缩至干，得多糖水解物备用。取1%的多糖水解物于高效硅胶G薄层板（10cm×20cm）上点样，以标准单糖为对照。展开系统：醋酸乙酯∶异丙醇∶乙酸∶水＝11∶4∶4∶1（V/V）显色：10%硫酸乙醇溶液，喷雾后于105℃加热10min。气相色谱分析〔4，6，8〕：取上述水解多糖30mg按下列步骤进行，加入30mg盐酸羟胺和1.0ml吡啶于90℃恒温水浴中振荡，加热反应30min，取出冷却至室温，加入1.0ml醋酸酐，于90℃恒温水浴中乙酰化30min，生成具有挥发性的糖腈乙酸酯衍生物。反应产物用旋转蒸发仪蒸干，残渣用2ml氯仿溶解，取样，进行气相色谱分析

6、，以标准单糖衍生物为对照。色谱条件：HpAgilent4890D气相色谱仪。色谱柱为石英毛细管柱Hp5（0.53mmid×15m）；FID检测器（氢火焰）；柱室温度200℃；气化温度270℃；燃气H2，0.22MPa；载气N2，0.19MPa，空气助燃0.30MPa；进样量1μl；程序升温，开始时，150℃保持1min，接着以5℃·min-1升至200℃，并于200℃保持10min。3结果分离纯化得到的YLS多糖呈白色粉沫，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。3.1紫外光谱分析YLS多糖在250～280nm之间无吸收，说明其中无蛋白质、氨基酸及核酸(见图1)。3.

7、2凝胶柱层析洗脱曲线为单一洗脱峰，表明所得多糖纯度较高(见图2)。3.3HPGPC测定结果在图谱中只有单一峰，证明纯度较高（见图3）。3.4薄层色谱分析见图4。在薄层板上从左至右依次为木糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、鼠李糖和YLS多糖水解样品（有两个斑点，分别表示为YLSR1和YLSR2）。结果表明，玉郎伞多糖主要由葡萄糖和阿位伯糖组成（各糖Rf值见表1）。表1YLS多糖水解物和标准单糖的Rf3.5气相色谱分析YLS多糖水解物在气相色谱上出现两个峰，其保留时间分别为9.456min和14.980min，与阿拉伯糖和葡萄糖的保留时间一致(见图5～6)，