网织血小板检测方法的改良及临床应用论文

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1、网织血小板检测方法的改良及临床应用论文【关键词】血小板减少;,.freelprovethemeasurementofreticulatedplatelets（RPs）andtoexploreitsclinicalapplication.MethodsUsingthiazoleorangeasafluorescentdye，RPseasuredbyanalyzingtheRNAcontentinplateletsin30normalcontrolsand48variousthrombocytopenia，i.e.idiopa

2、thicthrombocytopenicpurpura（ITP），aplasticanemia（AA），andinitially-treatedacuteleukemia（AL），etry.ThepercentageandabsolutevalueofRPsalgroup，ITPpatientshadasignificantlyhighpercentage（F=65.29，q=10.26，P0.01）andloalcontrols（q=0.51，P0.05），buttheabsolutevalueofRPsinALetho

3、dofreticulatedplateletdetectionhasbeenimprovedandasimpleandstableoneestablished，ethodfordiagnosisofvariousthrombocytopenia.［KEYⅡSoftL，500r/min离心5min，取上清，加入TES，2000r/min离心10min，弃上清，制成PRP。取FCM专用试管两支，每支试管中加入15μLPRP，50μLPBS和10μLCD41-PE单抗，标记血小板，漩涡混匀后室温避光孵育20min后，分别在对照管

4、中加入1mLPBS，测定管中加入TO试剂（20μg/L）1mL，再次室温孵育30min。1.4检测方法改良由于使用的TO试剂的浓度和孵育时间及设定的Mark（阴阳性的界线）的不同，对检测的结果有很大的影响，故对TO试剂进行了一系列不同浓度的稀释，并进行了检测标本的比较，以确定TO试剂的测定的最佳浓度。将TO溶于甲醇，使其终浓度为1g/L，-20℃保存作为储存液备用，PBS配成浓度为20μg/L应用液，可保存1周，结果稳定。参照MATIC等［4］描述的设门策略识别网织血小板，FSLOG为X轴，对数CD41-PE为Y轴，设CD

5、41阳性细胞为A门，另开一窗以SSLOG为X轴，对数（TO-Retic）为Y轴，对A门中的血小板进行分析，以自身血小板为阴性对照，沿血小板实际点图上缘设立界值，使其RP百分数在1%以下，检测标本与自身对照试验条件完全一致。流式细胞仪检测20000个血小板，RP结果以百分数表示，RP绝对值为血小板数乘以RP百分数。1.5统计学处理所得数据均以x±s表示，组间比较采用完全随机设计资料的方差分析。2结果正常对照组、ITP组、AA组、AL组RP绝对值分别为（18.16±6.60）×109/L、（8.98±3.09）×109/L、（

6、1.84±0.75）×109/L、（1.54±0.48）×109/L，RP百分数分别为（7.38±3.51）%、（7.38±3.51）%、（4.71±1.32）%、（6.51±1.47）%。ITP病人RP百分数明显高于正常对照组（F=65.29，q=10.26，P0.01），而RP绝对值明显低于正常对照组（F=85.07，q=19.59，P0.01）;AA病人RP百分数及绝对值均低于正常对照组（q=3.47、16.41，P0.05、0.01）;AL组病人RP百分数与正常对照组比较无明显差异（q=0.51，P0.05），但其

7、RP绝对值明显低于正常对照组（q=15.46，P0.01）。3讨论由于RP是刚从骨髓释放出来的未成熟血小板，它可以像检测网织红细胞反映骨髓红系的造血情况一样，用来鉴别血小板减少性疾病和监测治疗后的骨髓造血情况。血小板减少症为常见血液病，了解血小板的生成情况对血小板减少症发病机制（生成减少、破坏过多和分布异常等）的判断极为重要。目前临床上主要通过骨髓穿刺涂片，观察MK的数量及成熟情况来作为依据，因受取材、制片及操作者个人主观因素的影响，结果常有一定的偏差;且反复穿刺给病人带来较大痛苦，病人常难以接受，或者通过血小板特异性抗体

8、检测［5］，间接观察血小板破坏情况。传统的RP检测靠显微镜目视计数，费时费力，尤其在血小板减少时更难，从而影响了RP测定的开展和应用，而外周血RP能反映骨髓MK生成血小板的情况。1990年KIENAST等［6］用TO作为RNA的荧光染色，运用流式细胞仪开创了网织血小板的自动化计数，随后有许多作者在此基础