胃癌患者外周血survivin基因mrna表达及其临床意义

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1、胃癌患者外周血Survivin基因mRNA表达及其临床意义【摘要】目的检测胃癌患者外周血中肿瘤细胞Survivin基因mRNA表达，探讨其在胃癌微转移检测中的意义。方法采用逆转录分子信标实时荧光定量PCR（RT-QPCR）方法，以Survivin基因cDNA克隆重组质粒为标准品，检测胃癌患者外周血肿瘤细胞中Survivin基因mRNA模板拷贝数，分析拷贝数与临床资料之间的关系。结果Survivin基因mRNA分子信标实时定量方法的线性检测范围为104～109个拷贝，外周血肿瘤细胞Survivin基因模板拷贝数与患者的性别、年龄、TNM分期及病理类型差

2、异无显著性（P＞0.05），而与患者淋巴结转移及生存状况差异有显著性（P<0.05）。结论外周血肿瘤细胞Survivin基因mRNA表达可用于检测胃癌的血性转移，为早期诊断微转移的存在、评价患者预后、指导临床治疗提供依据。【关键词】定量PCR；survivin；微转移；外周血；胃癌ExpressionofsurvivinmRNAinperipheralbloodofpatientsplication【Abstract】ObjectiveTostudythemRNAexpressionofsurvivingeneinperipheralblood

3、ofpatientserasechainreaction(RT-QPCR)usingamolecularbeaconprobe，idcontainingthesequenceofsurvivinRNAdidnotcorrelatephnodemetastasisandpoorsurvival(P<0.05).ConclusionTheexpressionofsurvivinmRNAcanbeusedtodetectemicro-metastasisinperipheralbloodcirculationofgastriccancer.Itisa

4、usefulmarkertopredictprognosisanddecideonclicinaltherapy.【Keyicrometastasis；peripheralblood；gastriccarcinoma胃癌是人类常见的恶性肿瘤之一，在临床治疗中，复发和转移是常见的问题，直接影响到患者的预后。早期发现肿瘤患者外周血中是否有肿瘤细胞存在，不仅对判断肿瘤转移和复发有着重要的价值，而且对指导临床治疗，改善患者预后有重要的意义。随着逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）技术的广泛应用，可以检测到肿瘤患者外周血中常规方法（如CT、MRI、普通形态学及免

5、疫组织化学等）无法检测到的极少数肿瘤细胞中特异基因mRNA的表达，预示肿瘤的微小转移存在。近来，特别是荧光实时定量PCR技术的发展，不仅可以定量检测mRNA的原始模板拷贝数，而且由于特异性探针的引入，使其灵敏度也高于常规PCR的定性检测。Survivin是1997年［1］发现的凋亡抑制蛋白（inhibitorofapoptosis，IAP）家族成员之一，它在终末分化的成人正常细胞中很少表达，而在绝大多数肿瘤细胞中高表达［2，3］。2.3Survivin模板拷贝数与临床资料的关系本研究对未检测到SurvivinmRNA表达的样本，模板拷贝数以“0”计入

6、统计资料。56例胃癌患者外周血肿瘤细胞中Survivin基因mRNA模板拷贝数均值为2727.63个拷贝，标准差为341.94个拷贝；拷贝数与临床资料之间的关系见表1，结果显示：外周血中Survivin基因mRNA拷贝数与患者的性别、年龄、TNM分期以及病理类型差异无显著性（P＞0.05），而与淋巴结转移和患者生存期差异有显著性（P<0.05）。表1胃癌患者外周血SurvivinmRNA拷贝数与临床资料的关系3讨论肿瘤的浸润和转移是影响患者预后的重要因素，其中肿瘤细胞在血液循环中播散是肿瘤转移的方式之一，属于肿瘤转移的早期阶段，称为微转移。检测

7、患者外周血中微转移的存在，及时进行干预性治疗，可有助于减少肿瘤的复发和转移，提高患者生存率，降低死亡率。在微转移的检测中，检测方法的灵敏度和靶基因的选择就显得尤为重要。检测灵敏度越高，微转移发现的越早，对患者的治疗越及时；靶基因首先应该选择肿瘤细胞特异性的，其检测的结果能够正确反映肿瘤细胞的存在。常规PCR方法仅是对扩增后的产物进行定性或半定量检测，而非检测原始模板量。目前新的技术——实时荧光定量PCR技术，是在进行特异性引物扩增时加入特异的荧光探针进行杂交，在PCR扩增的同时即可通过探针荧光信号的变化观察结果，不仅简化了检测手段，而且大大地提高了检

8、测方法的灵敏度。在有标准品存在时，还可对原始模板进行拷贝数定量。对于Survivin基因mRNA表达的检测，