胃癌患者外周血htert mrna转录水平及临床意义

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1、胃癌患者外周血hTERTmRNA转录水平及临床意义作者：胡福军凌志强陈晓钟余传定【摘要】目的研究胃癌患者外周血中hTERTmRNA的表达，探讨其作为胃癌肿瘤细胞标志物的可行性。方法应用实时荧光定量RT-PCR技术检测96例原发性胃癌、50例胃溃疡和60例健康献血员血清中hTERTmRNA表达水平，并对阳性PCR产物进行克隆、测序。结果胃癌组hTERTmRNA表达水平（12.78±0.97）copies/ml，显著高于良性胃溃疡组（0.93±0.23）copies/ml和健康对照组（0.29±0.17)copies/ml。多变量分析表明，hTERT表达水平与患者性别、

2、年龄、肿瘤大小、肿瘤生长方式、肿瘤分化程度、淋巴管侵犯、静脉侵犯均无显著相关性（p>0.05），而与浸润深度、淋巴结转移、远处转移、pTNM分期及CEA有显著相关性（p<0.05）。结论qRT-PCR具有快速、敏感和特异的特点。定量分析外周血hTERTmRNA转录水平可作为胃癌的肿瘤细胞标志物之一，用于早期诊断。【关键词】胃癌肿瘤标志物hTERTmRNA实时荧光定量RT-PCR　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionandclinicalvalueofhumantelomerasereversetran

3、scriptase(hTERT)mRNAintheperipheralbloodofpatientsa.MethodsReal-timequantitativeRT-PCR(qRT-PCR)RNAin96gastriccancer,50gastriculcers,and60healthyindividualsajordisease.PCRproductRNAexpressionRNAexpressionhadnosignificantdifferencesinhTERTmRNAorsize,tumorgrophaticvesselsencroachmentandvE

4、inencroachment(p>0.05),buthadasignificantbetRNAexpressionlevelandthedepthoftumorinfiltration,lymphnodemetastasis,distantmetastasis,TNMstagingandCEAvaluesingastriccancer(p<0.05).ConclusionReal-timequantitativeRT-PCR(qRT-PCR)isarapid,sensitiveandspecificmethodtodetecthTERTmRNA.Andt

5、hehTERTmRNAintheperipheralbloodmaybeatumormarkerofgastriccancer,ormarkerHhumantelomerasereversetranscriptasemRNAhTERTmRNAReal-timefluorescencequantitativeRT-PCR(qRT-PCR)　　胃癌在我国死亡率居恶性肿瘤之首位，但早期诊治的5年、10年生存率分别可达到95％和90％［１］。因此，寻找敏感而特异的肿瘤细胞标志物对胃癌的早期诊治具有重要意义。端粒是真核细胞染色体末端的特殊结构，可稳定维持染色体的功能，防止染色

6、体DNA降解、末端融合，保护染色体结构基因，调节正常细胞生长。端粒长短和稳定性决定了细胞寿命，并与细胞衰老和癌变密切相关［２］。端粒酶（TERT）是使端粒延伸的反转录DNA合成酶，与细胞分裂及寿命控制有密切关系。端粒、TERT对临床肿瘤的诊断和预后判断有一定意义［2］。本研究，应用实时荧光定量RT-PCR（Real-timefluorescencequantitativeRT-PCR,qRT-PCR）技术检测胃癌患者外周血hTERTmRNA水平表达，探讨其作为胃癌肿瘤细胞标志物的可行性。　　1材料与方法　　1.1对象　　　　2000年8月至2006年12月手术切除的

7、胃癌组织标本96例，患者男58例，女38例，年龄31～78岁(中位年龄58.2岁)，术前均未接受放、化疗；胃溃疡手术标本50例，患者男31例，女19例，年龄37～71岁(中位年龄54.6岁)；另取健康献血员60例，男30例，女30例，年龄20～49岁(中位年龄38.5岁)。所有检测对象(胃癌、胃溃疡患者治疗前)均于清晨空腹静脉采血10ml，室温静置后分三步骤离心(1000g、10mins→1500g、10mins→3000g、10mins)，获取无细胞血清并可避免淋巴细胞的直接干扰。血清液氮速冻后保存于-80℃冰箱中直到试验结束。　　1.2引物的设计与合成