鸡血藤总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究

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1、鸡血藤总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究作者：黄锁义罗建华张丽丹【摘要】目的探讨鸡血藤总黄酮的提取、鉴别及对羟自由基的清除作用，以充分利用鸡血藤植物资源，避免资源的浪费。方法采用超声波乙醇浸提法从鸡血藤中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量，用鸡血藤总黄酮对羟自由基清除作用进行试验。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.3167mg/ml，回收率为99.94%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取鸡血藤黄酮类物质的有效途径。鸡血藤总黄酮提取液对Fenton体系产生的·

2、OH自由基有很好的清除作用。【关键词】超声波提取鸡血藤总黄酮自由基　　Abstract：ObjectiveInordertomakeuseoftheresourcesofSpatholobussuberectusdunn,avoidSpatholobussuberectusdunnetry．TheeffectofextractsonSpatholobussuberectusdunnscavengingofhydroxylradicalsg/mlandtherateofrecoveryethodisapurelyphysical

3、processandhasnotanypollution.ItisanidealSpatholobussuberectusdunnhaveeffectsonscavengingofhydroxylradicals.　　Keyent；Spatholobussuberectusdunn；Totalflavanone;Identification；Freeradical　　鸡血藤为传统中药，《中国药典》2000年版Ⅰ部收载鸡血藤为豆科植物密花豆Spatholobussuberectusdunn的干燥藤茎，其性温，味苦、甘，归肝、肾经

4、，有补血、活血、通络的功效，用于月经不调、血虚萎黄、风湿痹痛等症［1］。现代药理研究表明［2］：鸡血藤具有降血压、抗癌、抑菌、抗放射线的功效。近年来临床上常用鸡血藤治疗贫血以及各种原因引起的白细胞、血小板、红细胞等全血象减少和再生障碍性贫血等疾病，具有较好的疗效［2］。　　目前国内外对鸡血藤总黄酮提取的研究还相当的缺乏。黄酮类有效成分对治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有显著效果，无副作用，并以此开发出多种药品和保健食品［3］。目前有　　2.4定性实验-总黄酮的鉴别　　2.4.1颜色反应

5、　　紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。　　浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏30s，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。　　三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加１％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。　　乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。　　盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。　　2.4.2

6、纸层析取样品溶液10μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（体积比）为展开剂，上行展开5h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。　　2.5总黄酮提取物对·OH清除作用参照Fenton反应的方法建立反应体系模型［7］，利用H2O2与Fe2+混合产生·OH，但由于·OH具有很高的反应活性，存活时间短，若在反应体系中加入水杨酸，就能有效地捕捉·OH，并产生有色产物。反应式如下：H2O2+Fe2+→Fe3++·OH+OH-　　该产物在510nm处有强吸收，若在此反应体系中加入具有清除·OH功能的被测

7、物，便会与水杨酸竞争·OH，从而使有色产物生成量减少，采用固定反应时间法，在相同体积的反应体系(8.8mmol/LH2O21ml，9mmol/LFe2+1ml，9mmol/L1ml水杨酸-乙醇溶液)加入一系列不同浓度的鸡血藤总黄酮提取液，并以蒸馏水为参比，与试剂空白液比较，在510nm处测定各浓度下的吸光度，便能测定被测物(总黄酮)对·OH的清除作用，其清除率计算公式：清除率(％)=A0-AxA0×100%　　以实验的提取液总黄酮作为样品，分别取不同体积的样品定容到50ml分别测其对·OH的清除作用。从图1中可看出，鸡血藤总黄

8、酮提取液对由Fenton体系产生的·OH有很好的清除作用，随着鸡血藤总黄酮提取液浓度的增加，对·OH自由基的清除能力也增强，说明当黄酮类物质的浓度增加时，其清除率也增大。　　图1鸡血藤总黄酮提取液浓度与自由基清除率的关系（略）　　3讨论　　实验结果表明，本实验方法工艺简单，回