实验六病毒观察与培养真菌培养方法与形态观察

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1、医学微生物学实验实验六病毒的观察与培养真菌的培养方法与形态观察•实验内容：•1.病毒的观察：形态观察及生长状况观察•2.病毒的培养•3.真菌的培养、形态观察（真菌的单染法）和浅部真菌病临床标本检查•1.病毒的观察•（1）病毒的形态观察•（2）病毒的生长状况观察☻病毒的形态结构痘病毒脊髓灰质炎病毒鼻病毒上为模式图，下为电子显微镜下观察结果烟草花叶病毒狂犬病毒噬菌体上为模式图，下为电子显微镜下观察结果（2）病毒的生长状况观察病毒在细胞中生长繁殖的指标：1)细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE）:有些病毒在细胞内增殖时可引起细胞发生特有的形

2、态学变化（细胞病变），称为细胞病变效应（CPE）。2）包涵体(inclusionbody)：3）红细胞吸附：4）干扰现象：示教：病毒感染细胞CPE/正常细胞Negribodyinaneuron示教：病毒包涵体•2.病毒的培养•病毒的培养方法包括：（1）动物接种（2）鸡胚培养（3）细胞培养（1）动物接种（2）鸡胚培养：目前主要用于流感病毒的分离培养。卵壳气室壳膜绒毛尿囊膜尿囊腔胚胎卵黄羊膜腔卵白天花病毒，痘病毒和流感病毒，腮腺炎病毒HSV嗜神经病毒流感病毒初次分离•（3）细胞培养：将人或动物离体组织块或分散的活细胞，模拟体内的生理条件在试管或培养瓶内加以

3、培养，使之生存和生长，称为组织培养。目前一般所指的组织培养多指单层细胞培养。•是目前最常用的方法。常用的细胞有：•①原代培养细胞：采用机械或胰蛋白酶等处理离体的新鲜组织器官，制成分散的单个细胞悬液，加入生长液后，分装于培养管中培养，活细胞贴壁生长繁殖，数天后形成单层细胞，称原代细胞培养。•②二倍体细胞株：原代细胞经过多次传代仍能保持二倍体特性，称为二倍体细胞株。•③传代细胞系或株：来源于肿瘤细胞或细胞株在传代过程中变异的细胞系，是能在体外无限传代的细胞系。动物细胞原代培养过程图示教：原代细胞培养录像•3.真菌的培养与形态观察•（1）真菌的培养方法•（2

4、）真菌的形态观察•（3）浅部真菌病临床标本检查（1）真菌的培养真菌的营养要求不高；常用沙保弱培养基(Sabouraud′smedium)：蛋白胨、葡萄糖、氯化钠和琼脂。温度：22～28℃，但某些深部感染的真菌为37℃。pH：4.0～6.0生长速度:较慢可出现三种菌落：（1）酵母型菌落：与细菌菌落相似，圆形，表面光滑、湿润、柔软而致密、乳白或奶油色。（2）类酵母菌落：菌落表面同酵母型菌落，在菌落根部有假菌丝伸向白假丝酵母培养基内生长，乳白色。(血平板)（3）丝状菌落：是多细胞真菌的菌落形式，由许多疏松的菌丝体构成，菌落呈棉絮状，绒毛状或粉末状、菌落中央有

5、皱褶，外围有放射状沟，多为茶褐色。示教：酵母、类酵母型菌落和丝状真菌黄曲霉菌落小培养法：小培养法是采用真菌培养板或普通载玻片进行真菌培养。培养物可直接于显微镜下检查，也可经染色后观察。•（2）真菌的形态观察单细胞真菌：白假丝酵母，卵圆形，革兰染色阳性，着色不一，可见假菌丝。白假丝酵母多细胞真菌：丝状菌或霉菌，有菌丝和孢子。烟曲霉真菌的单染法（白假丝酵母菌）实验步骤：①制片（同革兰染色）②染色：滴加结晶紫（或碱性亚甲蓝）染色1min，水洗，吸干，油镜观察。•（3）浅部真菌病临床标本检查•浅部真菌病临床上极为常见，包括手癣、足癣、甲癣、头癣、体癣和股癣等，

6、其在检查方面多采用直接镜检。•示教：皮肤真菌•实验材料：白假丝酵母菌一管/小组，结晶紫1瓶/小组，玻片1个/人实验报告内容真菌的单染实验原理、实验步骤、实验结果绘图和结果分析。实验课考试：考试内容－细菌的单染注意事项－无菌操作、制片、染色、显微镜使用请每人准备一张空白纸，在左上角写上本人姓名和学号。