探讨乳腺癌her2基因扩增显色原位杂交与免疫组化检测方法对比

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1、探讨乳腺癌HER2基因扩增显色原位杂交与免疫组化检测方法对比大庆油［□总医院163001摘要：目的探究及讨论乳腺癌HER・2基因扩增显色原位杂交与免疫组织化学检测方法对比效果。方法选择在2010年6月至2012年10月入住我院接受治疗的153例乳腺浸润性导管癌患者作为研究对象，153例患者均组织蜡块行免疫组化、显色原位杂交检测。结果通过比较得出CISH基因扩增与HER-2IHC(+++)表达结果符合率较高，二者明显相关(均P&t;0.01)o结论CISH检测HER2基因扩增结果与IHC检测蛋白表达及FISH结果高度一致，可作为乳

2、腺癌HER2基因扩增检测的一项安全可靠的技术。关键词：乳腺癌；HER・2；免疫组化；显色原位杂交研究报道指出，约20%〜30%的乳腺癌患者能够检测到HER・2基因扩增及过表达，该指标的研究对判断预后具有重要作用，同时也是乳腺癌患者靶向治疗药物■赫赛汀使用的唯一指标［l］oCISH是近年来发展的一种新的检测乳腺癌HER-2基因状态的方法，为了对IHC及CISH两种检测方法进行研究和对比，笔者选取Y153例乳腺癌患者，回顾相关资料。1资料与方法1.1一般资料选取2010年6月〜2012年10月，在本院经病理学诊断的153例乳腺癌患者

3、。年龄25〜76岁,平均(48.2±7.8)岁。标本用10%中性甲醛固定，常规石蜡切片(4?m),脱蜡入水，备用。1.2HER・2IHC检测1.2.1试剂选用福州迈新生物技术有限公司的即用型非生物素免疫组化EnVision检测试剂盒（KIT-9901）o1.2.2操作步骤按照乳腺癌的HER・2免疫组化试剂盒的说明书操作。高压修复；滴加50?L3%过氧化氢，室温孵育10min,PBS冲洗；滴加一抗，室温孵育60min,PBS冲洗；滴加1滴聚合物，室温孵育20min,PBS冲洗；滴加1滴酶标抗鼠/兔聚合物，温育30mi

4、n；滴加100?LDAB显色液，冲洗；苏木素复染，封片。1.2.3结果判读标准（・）完全没有着色或少于10%癌细胞有胞膜着色；（+）：>10%的癌细胞呈现微弱、不完整的胞膜着色；（++）>10%的癌细胞呈现弱至中度完整的胞膜着色；（+卄）：>10%的癌细胞呈现强的、完整的胞膜着色。1.3HER-2CISH检测1.3.1试剂美国Zymed公司生产的地高辛标记的HER・2原癌基因原位杂交探针和试剂盒（SPOT・LightHER・2CISHTM试剂盒）。1.3.2操作步骤按照ZymedSPOT-LightHER-2C

5、ISHTM试剂盒说明书操作。切片蒸憾水洗后置加热预处理液内煮沸15min：胃蛋白酶孵化15min,脱水，凉干；每片滴加15?L地高辛标记的HER・2探针，杂交膜封片，原位杂交仪内95°C变性5min；37°C湿盒孵育过夜；次HSSC冲洗液冲洗5min；浸入浓度为3%双氧水的甲醇溶液，放置10min；浓度为0.01%的Tween-20PBS液冲洗3遍；滴加CAS-BLOCK,室温下孵育10min；滴加鼠抗人的地高辛抗体，温育30min；DAB显色30min,冲洗；苏木素复染，脱水，封片。1.3.3结果判读标准在400倍显微镜下观察

6、,超过半数的肿瘤细胞核内存在1〜5个信号点为无基因扩增；超过半数的肿瘤细胞核内存在6〜10个信号点为低度基因扩增；超过半数的肿瘤细胞核内存在10个以上信号点，或是信号点聚集成团状、簇状则为高度基因扩增［2］。1.4统计学处理采用SPSS18.0软件进行统计处理，采用x2检验法检验差异，当P<0.05为差异具有统计学意义。2结果2.1HER-2IHC检测结果阳性信号定位在细胞膜之上，为黄色(图1)。153例乳腺癌标本IHC检测HER・2蛋白表达30例(-),32例(+),47例(++),44例(+++)。2.2两种检测方式的

7、关系CISH基因扩增与HER-2IHC(+++)表达结果符合率较高，为98%,二者差异有统计学意义(均P<0.01)o见表3讨论HER-2基因状态不仅是预测乳腺癌患者预后的独立因素，同吋还是赫赛汀靶向治疗和辅助化疗的重要参考指标。检测HER・2基因目前在实验室最为常用的方法有IHC、显色原位杂交、荧光原位杂交[3-4]oIHC方法评估HER・2蛋白表达是目前首选的方法，但极易受到包括标本固定液差异、切片制作吋温度、抗体特异性以及评判人员主观因素等的影响，结果差异较大。FISH被誉为“金标准”⑸，结果可靠，受影响小，但只能在

8、荧光显微镜下观察，且设备、试剂昂贵、切片不能长期保存，国内病理实验室使用较少。CISH是建立在DNA技术上的一种HER-2基因检测方法，该方法通过普通显微镜能够对基因正常与否和组织学形态的变化一起进行观察，切片能长期保存，具有简单、快速、成本低、信号稳定的特点。