替莫唑胺白蛋白纳米粒在大鼠体内的药代动力学研究

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1、替莫卩坐胺白蛋白纳米粒在大鼠体内的药代动力学研究（浙江大学医学院附属儿童医院浙江杭州310003）【摘要】目的：研究替莫卩坐胺白蛋白纳米粒（TMZ-BSA-NPs）经大鼠尾静脉注射给药后的药物动力学特性。方法：制备TMZ-BSA-NPs和TMZ-Sol,给药后HPLC测血药浓度并计算、比较二者的药动学参数，研究TM乙BSA-NPs的药代动力学特性。结果：经药动学参数计算，TMZ-Sol在体内的代谢过程符合二室模型，TMZ-BSA-NPs的代谢过程符合单室模型。结论：经药动学参数分析，TMZ-BSA-NPs的牛物利用度好于TM乙Sol,TMZ-B

2、SA-NPs能够发挥更好的药效并且减少不良反应的发生。【关键词】替莫哇胺；白蛋白；纳米载体；血浆药代动力学【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）35-0048-02替莫哇胺可有效透过血脑屏障，直达病灶，是公认的治疗效果最好的抗胶质细胞瘤药物⑴，现阶段国内的替莫卩坐胺药物都是胶囊制剂，而手术患者常不适用固体药物，因此有必要改用其他给药方式。由于TMZ在水中溶解性差、水溶液稳定性差，木硏究根据纳米载体具有缓释性、特别是能够有效传递水难溶性药物的特点，使用BSA制备TMZ-BSA-NPs,考察其药代动力学行为

3、，为其缓释、减毒的特性提供实验依据。1•实验材料1.1仪器与试剂Agilentl200高效液相色谱仪；AgilentExtend-C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）；替莫卩坐胺（纯度>99%）；牛血清白蛋白（纯度98%）；其他试剂均为分析纯。1.2实验动物SPF级雄性SD大鼠，体重300±30g（浙江中医药大学实验中心提供）。2方法2.1血药浓度测定2.1.1样品制备雄性大鼠12只，随机分成各6只的两组。对照组按8mg/kg剂量TMZ-Sol尾静脉注射给药，实验组按同样剂量TMZ-NSA-NPs

4、给药,给药后5,lOmin和0.5〜2.0h（每0.5h）,2.0h〜4.0h（每lh）,4h〜:L4h（每2h）股动脉插管取血ImL,3500rpm/min离心20min,分离血浆200μL,加100?g/mL甲硝卩坐溶液25?L,酸化后置・20°C储存备用。2.1.2色谱条件取样本200&mu儿置离心管中，用600μL乙酸乙酯提取两次，涡流混合3min,3500r/min离心5min,取上层液于另一离心管中，40°CN2吹干，加100&mu儿流动相（0.5%乙酸冲醇85：15）溶解残渣，上样20?L,柱温：25°C,检测波长：3

5、29nmo2.1.3对照品储备液精密称取TMZ标准品lO.Omg,置50mL容量瓶中以0.5%冰乙酸溶解定容成TMZ标准储备液，4°C贮存备用。2.1.4专属性考察选择含内标、TMZ标准品、内标与TMZ标准品的大鼠空白血浆上样测定考察方法专属性。2.1.5血浆标准曲线将TMZ标准储备液稀释为50、20、10、2、1、0.5?g/mL后，吸取各浓度稀释液50?L,40°CN2吹干，加200&mu儿空白血浆及25&mu儿内标，上样后记录峰面积，求标准曲线方程。2.1.6精密度与冋收率量取1、10、50?g/mLTMZ储备液50?L,40°CN2吹干

6、，加200&mu儿酸化血浆上样，Id测定5次计算日内精密度，连续测定5d计算日间精密度；上样测定TMZ储备液，根据TMZ的测定浓度计算冋收率。2.2纳米胶体溶液配制水相：称取2.5gBSA,溶解于50mL蒸憾水，调pH到5.4并用TMZ饱和备用；油相:精密称取150mgTMZ,200mgGTCC并加2mLCH2CI2；将水相加入油相,在750psi下循环10次，即得BSA纳米胶体溶液。2.3药动学数据分析选择DAS软件2.1版进行药动学参数计算。3•结果3.1血药浓度测定结果实验组和对照组药■时关系见图1,药代动力学参数见表lo经DAS程序计算

7、，对照组药动学过程符合二室模型，实验组符合一室模型。实验组Cmax小于对照组，Tmax>MRT（O&nfin;）、AUC（0-t）均大于对照组。3.1.1专属性考察专属性考察色谱图见图2。图2专属性色谱图图中可见内标甲硝畔的保留时间约在9min,TMZ的约在6min,图2・3中甲硝哩和TMZ分离良好，说明在该色谱条件下方法专属性强。3.1.2血浆标准曲线以浓度C为纵坐标、TMZ/甲硝畔峰面积P为横坐标进行线性冋归，得冋归方程P二0.054300.0036,表明C和P具有良好的线性关系。3.1.3精密度与回收率计算测定的日内精密度（％）分别为7・

8、22、5・06、2・38,日间精密度（％）分别为8.16>7.22、3.47o回收率（％）分别为88.12±4.33>92.38&plu