产胞外多糖酵母菌株的筛选鉴定及多糖结构初步研究

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1、摘要川Jl『『JI『『IJ『

2、J『IJI『『J川Ⅲ『JJIJIffffJill川Y20512,,,11i10Jlliii7i摘要微生物多糖是由细菌、真菌和藻类产生的多糖，以胞壁多糖、胞内多糖和胞外多糖3种形式存在。胞外多糖由于具有易于分离、可连续发酵、不受季节、地域和病虫害的限制等优点，日益受到学者们的重视。酵母多糖是微生物胞外多糖的一种，研究发现其具有多种生理活性，能够提高机体免疫力，还具有抗氧化、抗病毒和抑制肿瘤等作用。本文的主要研究内容和成果如下：(1)从自然界筛选到3株胞外多糖产量较高的酵母菌株，通过5．8SrDNA序列测定

3、及系统发育分析对这3株酵母进行了鉴定，结果表明：从左优红葡萄中分离得到的Z14和Z20与东方伊萨酵母(Issatchenkiaorientalis)处于同一分支，相似性达到99％以上；从落叶松附近表层土壤分离得到的L25与土生隐球酵母(Cryptococcushumicolus)处于同一分支，相似性为98．8％。(2)为提高胞外多糖产量，对东方伊萨酵母Z20的发酵工艺条件进行了研究，Z20产胞外多糖的最优发酵培养基配方为：葡萄糖8％，fNH4hSO．．0．2％，KH2P040．1％，酵母浸粉0．1％，CaCl20．01％，在此培养基

4、下，胞外多糖产量为2．046mg／mL，比原始菌株的产量1．137mg／mL提高80％。Z20产胞外多糖的最佳发酵条件为：初始pH为6．0，摇床转数为180r／min，装液量为50mL／250mL，发酵温度为30℃，接种量为2％，发酵时间为6d，在此条件下，胞外多糖产量可达到2．327mg／rnL，产量提高了104％。(3)菌株Z20的胞外多糖经DEAE．Cellulose52层析初步分离纯化得到单一的纯化多糖组分EPS．I。利用傅立叶红外光谱对EPS．I进行分析，发现EPS．I具有．OH、．CH、．C=O等典型的多糖特征官能团；利

5、用气相色谱对EPS．I的水解产物进行分析，结果表明：EPS．I的水解产物由甘露糖、木糖和鼠李糖三种单糖组成，组成比例分别为84．9l％、11．47％和3．62％。(4)对菌株Z20胞外多糖的体外抗氧化和体外抑菌活性进行了初步研究。以胞外多糖的总抗氧化能力和对DPPH、羟基自由基、超氧阴离子的清除率四个方面来考察EPS．I的体外抗氧化能力，结果验证了EPS．I具有抗氧化活性，当EPS．I浓度为20mg／mL时，对DPPH·和超氧阴离子的清除率均达到80％以上．用滤纸片法测定了EPS．I饱和溶液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、

6、地衣、青霉和黑曲霉的抑制作用，试验证明EPS．I对以上菌种的生长繁殖均无明显抑制作用。关键词酵母；胞外多糖；发酵条件优化；结构分析；体外功能东北林业大学硕士学位论文AbstractMicrobialpolysuccharideswereproducedbybacterial，fungiandalgae．Microbialpolysaccharideswhichincludedcellwallpolysaecharide，inWaeellularpolysaecharideandextrcellularpolysaccharidege

7、tIno他andmoreattentionfromthereaschersfortheirsuperioritiessuchasbeingeasytoseparation,continuousfermentation,noaffectionofseason,regional，diseasesandinsectpests．Yeastpolysaccharideisakindofmicrobialextrcellularpolysaccharideswhichhasmanyphysiologicalactivities，suchasmo

8、dulatinghumanimmunesystem,oxidationprevention,antivirus，antimmorandSOon．1f1豫maincontentsandresultsofthisthesisareasfollows．(1)Threehigherexopolysaccharide-producingyeaststainswe他obtainedbyscreeningfromnaturalsamplesusingspread-platemethod，Theresultsof5．8SrDNAsequencean

9、dphylogenefictreeanalysisshowedthatsimilaritiesoftwoyeastsisolatedfrom"Zuoyouhong”grape(Z14andZ20)wereover99％compared