蝉蜕多糖的分离纯化

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1、.蝉蜕多糖的分离纯化一、实验目的：掌握多糖的分离纯化方法。二、实验原理：根据相似相容的特点，糖类易溶于水，不容于有机溶剂，可用水提醇沉的方法进行提取。采用醇沉法获得的多糖常混有较多的蛋白质，可用盐酸法除去蛋白质。三、实验材料蝉蜕95％乙醇盐酸蒸馏水电热鼓风干燥箱粉碎机冰箱离心机圆底烧瓶试管四、实验步骤1、预处理拣选蝉蜕清洗除杂3～4次，反复漂洗，直至水澄清。将样品放在报纸上摊开，置于60℃鼓风干燥箱中恒温鼓风加热干燥8h，称重。高速粉碎机粉碎，粉碎后样品过筛备用。2、提取（水提醇沉）称取蝉蜕药材细粉8g于250mL圆底烧瓶。按固液比1∶20加

2、蒸馏水，回流提取3次，每次1h。合并提取液，浓缩至药液比1∶1，加入95%乙醇至含醇量90%。➃置冰箱中放置过夜后4500r/min离心15min。➄取上清液回收干燥，即得蝉蜕90%水提醇沉物残渣干燥，即得醇沉渣。...3、纯化取样品浓缩液，用2mol/L盐酸调节其PH至3，放置过夜，在3000r/min条件下离心，弃去沉淀即脱去蛋白质。五、实验观察预处理后用碱溶液提取法提取蝉蜕多糖。具体方法：将处理后的蝉蜕加入2倍体积的1mol/LNaOH,在100℃水浴中加热1h，过滤收集滤液，在滤渣中加入2倍体积的1mol/LNaOH,在100℃水浴中

3、加热1.5h，过滤收集滤液,重复此操作3次，每次重复分别增加0.5h，最后合并滤液。100℃水浴浓缩至原体积0.2倍，加入3倍体积的冰冻无水乙醇，4℃过夜，6000r/min离心10min弃上清液，沉淀用蒸馏水溶解，沸水浴浓缩，无水乙醇沉淀，离心除去有机溶剂,收集沉淀，50℃干燥至恒重即为蝉蜕多糖。共进行3批次平行实验。1、 制作标准曲线：准确称取105 ℃烘干至恒重的葡萄糖50mg于500ml容量瓶中配成0.1 mg/ml 的标准溶液，用蒸馏水分别配成0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/ml。1 ml标准液分别加入 5

4、% 苯酚溶液1 ml，并迅速加入浓硫酸5 ml，静置10 min。...摇匀，30℃放置30 min后于490nm测定OD值。➃以葡萄糖含量为横坐标，OD值为纵坐标，制作得到标准曲线。 2 样品含量测定：吸取1.0ml样品液，按照上述步骤操作测定OD490，并代入标准曲线计算样品的总糖含量。...蝉蜕多糖的分离纯化摘要：目的：本实验是从蝉衣中提取多糖,并研究蝉蜕多糖的性质。方法：将蝉衣去除杂质，使用膜超滤对多糖进行分离提取，进行脱钙、脱蛋白、脱乙酰等处理；采用酸碱滴定法测定脱乙酰度,超离心法测定提取多糖的纯度,凝胶色谱法粗略测定多糖的相对分

5、子质量,硫酸蒽酮法测定多糖的总含量。结果:蝉衣多糖的平均提取率为---，脱乙酰度为---，蝉衣多糖的纯度,--相对分子质量为---,多糖的总含量为---结论：蝉衣多糖易提取,且纯度较高,具有研究价值。关键词:蝉蜕;多糖;提取蝉蜕(Periostracumcicadae，PC)为蝉科昆虫黑蚱CryptotympanapustulataFabricius的若虫羽化时的蜕壳［1］，别名蝉衣蝉蜕蝉壳知了壳［2］首载于名医别录，蝉蜕性甘寒，味咸，是一种常用中药，具有散风解热清肺利咽解表透疹解毒消炎清肝明目，安神定志止咳平喘息风止痉明目退翳之功效［3，4

6、］，现代药理学研究表明，蝉蜕除具有解热镇痛镇静抗惊厥解痉等作用外，还具有一定的抗凝作用，如蝉蜕水提液可显著降低高脂血症大鼠红细胞聚集指数，抵抗体外血栓形成，并能明显缓解哮喘的微观血瘀状态［5］。随着科学技术的发展，其功效不断地被发现，且效果明显，现代药效学证实,本实验对蝉蜕的多糖进行提取分离，为研究蝉蜕的有效成分提供基础数据。1试剂与仪器2方法...2.1预处理［6］拣选蝉蜕清洗除杂3～4次，反复漂洗，直至水澄清。将样品放在报纸上摊开，置于60℃鼓风干燥箱中恒温鼓风加热干燥8h，称重。高速粉碎机粉碎，粉碎后样品过筛备用。2.2多糖的分离提取预

7、处理后采用微波浸提［7］的方法提取蝉蜕多糖。具体方法：将处理后的蝉蜕加入10倍体积的蒸馏水，，微波功率700W、微波处理时间6min，然后4000r/min离心处理10min，收集上清液，用旋转蒸发器减压浓缩至原体积的10%。将浓缩液加入其3倍体积的体积分数为95%的乙醇，静置6h以上，4000r/min离心10min，收集沉淀，冷冻干燥得粗多糖。取样品浓缩液，用2mol/L盐酸调节其PH至3，放置过夜，在3000r/min条件下离心，弃去沉淀即脱去蛋白质。氧化脱色：以浓氨水或NaOH液调至PH8.0左右，50℃以下滴加H2O2至浅黄色，保温

8、2小时。依次用丙酮、无水乙醚和无水乙醇洗涤多糖，即可得到较为纯净的多糖。此法较为简单，便于操作，多糖损失也较小。2.3蝉衣多糖的脱乙酰［8］称取一定量制得的蝉衣多糖