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1、实验二十高氏1号培养基的制备一、目的要求通过对高氏1号培养基的制备，掌握配制合成培养基的一般方法。二、基本原理高氏1号培养基是分离和培养放线菌的合成培养基。这种培养基是由可溶性淀粉（作为碳源）,KNOb（作为氮源）,NaCKOPO,-3H20.MgS0.-7H20（作为无机盐，为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离子）和FeSOi•7H20（作为微生物的微量元素，提供铁离了）等组成。由于磷酸盐和镁盐和混合吋产生沉淀，因此，在混合培养基成分时，-•般是按配方的顺序依次溶解各成分。对于象FeSO.•7氏0这样的微量成分，则可预先配成高浓度的贮备液，在配制培养基时按需要加入一定的量。高氏1号培养
2、基配方如下：可溶性淀粉20gNaCl0.5gKNOalgK2HPO4•3H200.5gMgSO.•7H,00・5gFeSO.•7比00.Olg琼脂15—20g水1000mlpH7.4—7.6三、器材可溶性淀粉,KNO3,NaCl,OPO,•3H,0,MgSO；•7H,0,FeSO,•7H：O琼脂，lmol/LNaOH,lmol/LHC1；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5・5—9・0）,棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。四、操作步骤1.称量和溶化按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少丁
3、所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。再称取其他各成分依次逐一溶化。对微量成分FeSOi•7氏0可先配成高浓度的贮备液后再加入，方法是先在100ml水中加入lg的FeSO.•7氏0配成0.01g/ml,再在1000ml培养基中加入1ml的0.01g/ml的贮备液即可。待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如要配制同体培养基,其溶化过程同实验十九。2.pH调节、分装、包扎、灭菌及无菌检查同实验十九。五、实验报告思考题（1）什么叫天然培养基？什么叫合成培养基？（2）配制合成培养基加入微量元素吋最好用什么方法加入？天然培养基为什么不需要另加微量元素？实验五微生物培养基的配
4、制和灭菌培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。培养基为微工物的工长提供营养物质和生存空间。它具冇微牛物正常牛:活所盂的各种养料和适宜的环境条件；（1）适当组分和比例的营养物质；（2）适宜的pH值；（3）介适的渗透压；（4）保持无菌状态。所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。培养基的配制是微牛物学工作者的主要技术操作培养基的种类：根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类：介成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。半合成培养基：由一部分纯化学物质和刘一部分天然物质配制而成。天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。从培养基的物理状态来分
5、：液体培养基：不加凝固剂的液态状培养基。固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状培养基或固体状农副产詁培养基。半固体培养基：在液体培养基中加入0.2%-0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。微生物最常用的凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。琼脂是从海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。是一种多糖类化合物，主耍成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种对逆性胶体，在常规浓度下加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42°C以下，又凝固为固体。一、目的要求1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。2.了解
6、几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。3.熟悉分离、培养微生物前的冇关准备工作及操作方法。二、实验材料1.药品：牛肉膏、蛋口腺、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4.KN03、MgSO4-7H2O>FeSO4・7H2O筹。2.高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。3.其它：天平、牛角匙、电炉、1NHC1、INNaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量简、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养血、吸管、各种包装纸防水纸、绳索、棉花、标签等。三、实验程序（一）、培养基配制1.培养基配制的一般方法和步
7、骤（1）称量：按照培养基配方，正确称取各种原料放于搪瓷杯中。（2）溶化：在搪瓷杯中加入所需水量（根据实验需要加入蒸饰水或白來水），用玻棒搅匀，加热溶解。（3）调pH值（调pH也町以在加琼脂后再调），用INNaOH或INHC1调pH,用pH试纸对照。表6-1琼脂和明胶的特性比较比较项目明胶比较项目琼脂明胶熔点（X?）9625微生物可利用性绝大多数微主物部分微生物凝固点9）4020不能水解利用能水鋪利用酸碱度微酸1酸性耐热性强弱灰分伙》16.014
