观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征

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1、观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征实验目的1•初步掌握小鼠睪丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。2.观察小鼠睾丸染色体的数冃及其形态特征；3•认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图实验原理（-）制作染色体标木的先决条件：1•细胞具冇旺盛的分裂能力（a.选择活跃的组织如睾丸，骨髓。b.施加药物使细胞分裂如PHA）2•设法得到大量中期细胞，秋水仙素处理。3•染色体特征：1.数目（2n=?）2.长度（绝对长度、相对长度）3.着丝粒位置（MSMSTT）4.随

2、体与次缢痕的数冃、大小和位置5.带型分析（二）操作方法利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。在小鼠睾丸中，细胞冇丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不尙要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标木，可观察到许多处于分裂屮期的染色体，可以进行染色体组型分析。减数分裂是细胞分裂染

3、色体数目减半时发生在性细胞的形成过程屮。哺乳动物在性成熟以后，梢巢内的性细胞总是在分批分期不断的成熟，因此，对哺乳动物的粕巢进行一定的技术处理，随时都可以获得减数分裂过程中各个时期染色体的标本。对于小鼠精巢染色体标木的制作，一般包括以下几个要点：①川一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期，使中期染色体停留在赤道而处；②用低渗法使细胞膨胀，以至于在滴片时细胞胀破，使细胞的染色体铺展到载玻片上；③空气T•燥法可使细胞的染色体在载片上展平，经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。（

4、三）中期染色体的特征1、突出在纺蚀丝的牵引下，染色体的着丝点集中到细胞中央的道板上；2、DNA高度螺旋化。短粗的染色体清晰可见，染色体数目形态稳定，便于观察；3、由于染色体高度集中，造成纺锤体清晰可见。通过木实验的结果看，木实验要想做的较好不太容易，需要娴熟的技术和耐心。（四）原理分析通过获取小鼠睾丸细胞（分裂能力强），本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。一•般观察有丝分裂屮期，染色体的形态最典型、最易辨

5、认和区分。因此，制备染色体标本获収的是中期细胞。实验用品1.材料小白鼠2.试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCI溶液）、0.3%KCI低渗溶液、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液3.器材：解剖盘、解剖银、解剖剪、小烧杯、吸管、玻璃刻度离心管、恒温水浴锅、离心机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等实验步骤预处理一取睾丸一剪碎一离心-4氐渗一离心一固定一离心一固定一滴片一染色一观察（一）小白鼠染色体标本制作1.预处理：取雄性小鼠按每克体重注射4ug,给小白鼠注射秋水仙素,

6、经24・16h后,断头法杀死小鼠，去除睾丸用生理盐水（0.9%的NaCI）洗去血污2.放入装有lml0.3%KCI液的小烧杯中剪碎（呈乳白色）3.用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3%KCI液至4ml4.37°C静置30min,进行低渗处理5.离心：800-1000r/min离心8min,弃上清6.加入2ml甲醇冰醋酸固定液（3:1）,并用吸管吹气，轻轻打散细胞，固定8min；7.再以800-1000r/min离心8min；8.弃去上清液，加1ml固定液，制成细胞悬液固定5min9•取清洁的低温预冷载

7、片，距10J5min高度滴F2-3滴细胞悬液，从一边轻轻吹气并随时轻轻敲打，以使细胞均匀分布和促进染色体展开10.用滤纸擦去载片上多余液体，空气干燥后染色20-30min（二）小白鼠染色体标本染色与观察1•倒置染色法一一在玻璃板上用废旧载玻片作支架，使标本载玻片的标本面向下放置到支架上，在玻璃板和标本载玻片之间滴加Giemsa染液。口的一可以节省染料，二可以避免染液快速挥发，三可以防止染色颗粒沉淀，影响观察。在操作时应注意，多个样品同时染色应摆放紧密，不要冇间隙；滴染液时应尽量慢，不要冇气泡，以免部分

8、染色体不被着色。2.用Giemsa染色20〜30分钟，细水冲洗玻片背面,去多余染液,气干。3•镜检：低倍镜下寻找分散良好、染色适中的分裂相，高倍镜或油镜下观察染色体形态并计数。注意事项（一）实验操作1•低渗时不能使细胞因吸水而涨破，但也要保证浓度和吋间，以免染色体不能展开。2.离心要控制在800-1000r/min,过大会使细胞涨破，导致实验失败，时间也要控制，过长也会彫响观察3.固定时间要足够，固定作用不足，染色体形态不清晰。4.滴片要保证至少10-1