钙磷氮三种元素对葛仙米球状体诱导和生长的影响

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1、钙磷氮三种元素对葛仙米球状体诱导和生长的影响　　摘要：葛仙米是一种经济价值很高的水生蓝藻类，具有食、药用价值。为了能在试验室条件下尽快地诱导葛仙米球状体，并且使其长大，探索了氯化钙、磷酸氢二钾、硝酸钠这3种元素在培养配方中的最佳浓度分别为288g/L、80g/L、15g/L。试验结果表明：这几种元素在培养基中的合适浓度配比对球状体诱导和长大更有利。　　关键词：葛仙米培养；球状藻体；配方调整；透气培养　　葛仙米（NostoccommuneVanch）是一种经济价值很高的水生蓝藻类，属念珠藻属，学名拟球状念珠藻，

2、拉丁文为Nos-tocsphaemidesKutzing。具有食、药用价值，因生长在稻田或浅水池沼里，形似木耳的胶团，故称之水木耳或田木耳。葛仙米是一种淡水藻类，为湖北鹤峰县的著名特产，现在由于耕作方式、农药化肥的使用，使葛仙米的产量大大降低，在走马坪镇的个别地方甚至已经绝迹，由于野生资源锐减，因此，葛仙米的人工培养具有一定的开发价值和应用前景。试验室条件下葛仙米的生长速度除了受光照、温度、pH值等因素的影响外，还受其它因素的影响，其中培养基中钙、磷、氮这3种元素的量就是重要的影响因素。　　1材料与方法　　1

3、.1试验材料　　葛仙米藻种由湖北武汉中国科学院水生生物研究所提供。　　1.2试验仪器7　　显微镜、超净工作台、灭菌锅、电子天平、光照培养架。　　1.3试验方法　　对藻种，采用固体培养基和液体培养基2种方法培养。液体培养是采用BGll0，其中除了微量元素和BGll0配方一致外，其它大量元素按照调整以后的BGll0配方进行培养。从固体培养基表面取得球状藻体，无菌操作下接种到液体培养基中，培养15天，更换液体培养基，如此培养3个循环。固体培养是从液体培养基中，在无菌操作的条件下，挑选颜色为浓绿色，直径平均?R3.5

4、mm的球状藻体，研磨成糊状，以同配方的液体培养基辅助过筛，得到的浆状研磨液用吸管吸取，每2.2～2.5mL接种于50mL每瓶的固体培养基中，在温度为25℃，光照为3000Lux（2根35W、220V白炽灯对应0.62m2的培养架面积）的条件下，培养15天即可在解剖镜下看到粒径约0.5mm的球状藻体。　　试验中用的B配方为：（1）硫酸镁75g/L。（2）磷酸氢二钾40g/L。（3）EDTAlg/L。（4）氯化钙36g/L。（5）柠檬酸+柠檬酸铁铵6+6g/L。（6）碳酸钙36g/L。（7）微量元素：硼酸2.86

5、g/L。MncL2?4H2O1.81g/L。ZnSO4?7H2O0.22g/L。CuSO4?5H2O0.079g/L。钼酸钠0.39g/L。硝酸钴0.0494g/L。（8）硝酸钠10g/L。试验中的固体培养基配法：配制1L固体培养基，先加9g卡拉胶，加试验用蒸馏水溶解卡拉胶后对应的加B配方各1mL，用蒸馏水定容到1L，然后微波炉加热10-12min，用NaOH溶液调节pH值到7.3，装瓶加盖，121℃灭菌20min。7　　试验中的液体培养基配法：配制5L液体培养基，先加4L试验用蒸馏水，然后加B配方各5mL，

6、再加960mL蒸馏水，用固体氢氧化钠调节pH值到7.3，装瓶（约15瓶）加盖，121℃灭菌20min。　　1.3.1钙对葛仙米球状体诱导和长大的试验。研究发现，葛仙米钙与土壤中钙有明显的正相关关系，土壤中的钙很容易被葛仙米同化吸收。用B配方其中（4）为钙浓度，设计浓度梯度标记为BCa1、BCa2、BCa4、BCa8、BCa16。即（4）分别按照1、2、4、8、16mL/L其它不变，各配固体培养基10瓶（其中5瓶用塑料瓶盖封盖，5瓶用透气封口膜封盖）总共50瓶。其中B配方各个号添加次序为（4）、（1）、（5）、

7、（3）、（6）、（7）、（2）、（8）。在固体培养基上长出直径约3mm的球状体颗粒后，配制BCa1、BCa2、BCa4、BCa8、BCa16各5L装15瓶液体培养基，全部用封口膜封盖进行固转液培养。　　1.3.2磷对葛仙米球状体诱导和长大的试验。在自然条件下周围磷浓度的波动会引起葛仙米球状体藻殖段的形成。念珠藻可以利用一些有机磷的化合物。用B配方其中（2）为磷浓度，设计浓度梯度标记为BCa1、BCa2、BCa4、BCa8、BCa16。各配固体培养基10瓶（其中5瓶用塑料瓶盖封盖，5瓶用透气封口膜封盖）总共50

8、瓶。其中B配方各个号添加次序为（4）、（1）、（5）、（3）、（6）、（7）、（2）、（8）。用B配方配制BCa1、BCa2、BCa4、Ca8各5L固转液培养继续观察磷浓度对长势的影响。　　1.3.3硝态氮对葛仙米球状体诱导和长大的试验。葛仙米原植体形态建成过程在充气和有硝态氮存在的情况下，较快。硝态氮的存在尽管使异型胞减少，但不能完全阻止异型胞的分化。无氮充气条件下，最后形成的原植体多为球形，而在