酶免疫荧光测量中的数据处理

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1、第一章引言20世纪中叶以来，一系列的免疫分析技术，逐渐被创立，免疫分析技术是生物医学领域中的新方法之一。其特点是高特异性、高灵敏度，能检测大多数临床上有意义的物质。由于免疫分析的高特异性，因而能用于复杂样品如尿液、血液等的分析，分析费用低廉，操作简便，所以，被广泛应用于医学和生物学研究领域。放射免疫分析技术(Radioimmunoassay，RIA)应用了放射性同位素标记、测量和免疫反应的原理，在大多数情况下可以大大简化样品的提纯分离工作，其灵敏度高、特异性强是其他方法所不能替代的，是竞争性分析法中创建最早、应用最广的一种。放射免疫分析技术的问世，是定量分析技术一项划时代的进步，将微量生

2、物样品检测化学分析法的最小检出值，由毫克、微克级提高到纳克、皮克甚至毫皮克级的水平，从而为生物医学基础理论研究和临床疾病诊断提供了新的实验手段，为加速生物医学现代化进程作出了非儿的贡献。在RIA基本理论的基础上派生出一类非放射性标记免疫方法，其中已被广泛采用的有酶联免疫分析法(EIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)。它们共同的优势是具有和姒相似的高特异性和高灵敏度，而其标记物制各简易、有效期长、无污染、实现自动化分析系统等方面又超过RIA。1．1放射免疫分析法(Radioimmunoassay，砒A)放射免疫分析法，又称放射性体外分析法，或竞争放射

3、分析法。Berson和Yelow于1959年首次提出了竞争抑制免疫反应原理，创建了RIA检测技术，用于糖尿病患者胰岛素含量的测定【1】。放射免疫分析是利用放射性核素示踪技术的高度灵敏性和免疫化学的高度特异性相结合，建立的一种体外超微量分析方法。可以用来测定多种抗原和抗体，包括病毒、细菌、寄生虫等。广泛应用于内分泌学、免疫学、药理学、传染病学、肿瘤学、心血管疾病学、血液学、妇产科学等临床诊断和基础理论的研究。在内分泌学中，绝大多数激素都可用刚A测定，如胰岛素、生长激素、三碘甲状腺原氨酸、甲状腺素、促甲状腺激素、促甲状腺激素释放激素等。RIA用来诊断和鉴别诊断各种内分泌疾病，还可了解内分泌各

4、腺体的功能状态，研究激素生成、分泌、降解的生理或病理代谢过程等【21。在免疫学中可测各种免疫球蛋白，为判断机体免疫能力提供了重要价值。可用于诊断疾病、如用甲状腺球蛋白抗体，抗微粒体抗体诊断慢性淋巴细胞性甲状第一章引言腺炎或用乙肝抗原诊断乙肝有的则可了解机体药物反应情况，如胰岛素抗体存在时，胰岛素对机体就不能产生作用等pJ。此外，药理学的RIA近年来发展也很快，用于诊断药物中毒、监测药物在体内浓度，为调整剂量提供依据。在传染病中测乙肝抗原在诊断肝炎分型中有着重要价值，目前已发展到鉴别丙型肝炎和丁戊型肝炎的水平并且对分析传染源、传染途径及制定预防措施均有指导意义。在血液学中可测铁蛋白、血纤维

5、蛋白溶酶、血小板抗体、红细胞生成素、Rh因子等，为血凝机制的研究和一些血液病的诊断与发病机制的研究丌拓了广阔的前途。在心血管疾病中，最近建立的血管内皮素的RIA为研究肌红蛋白强效收缩血管的生理病理及临床意义提供了手段。在肿瘤学中应用了肿瘤相关的RIA，用于普查、诊断、定位和监测疾病的发展过程及其转归，由单一指标发展到联合测定，为早期诊断和治疗起到了积极作用；在妇产科和计划生育中RIA技术为诊断早早孕和绒毛膜上皮癌提供了有效手段。各种类固醇激素的RIA，对研究新的避孕药、提高避孕效果和减少副作用具有重要作用卜¨。放射性免疫分析方法具有以下优点：1．灵敏度高，其最小检测值可达ng．mpg水平

6、(10。9—10。4g)，是一般化学分析法所达不到的；2．特异性强，这是由于抗原抗体反应的高度特异性决定，如吗啡类抗体只能与吗啡类抗原结合，因此不需要对样品进行提纯即可直接测定；3．快速、简便，免除了烦琐的化学提纯步骤，可以利用自动加样计数、记录计算等方法，使方法自动化，从而减少了人力，提高了工作效率，增加测量样品的数量，满足广大基层单位临床及研究工作中分析大量样品的要求。放射免疫分析方法也存在缺点：1．应用放射性同位素，主要是应用125I标记，由于药剂中标记同位素的放射性，会使药剂本身分解，从而使药剂失效。2．由于常用的放射性同位素半衰期短，药剂只能保存较短的时间，有效时间短：3．试验

7、废物难以处理，容易对环境造成放射性污染等。因此自非同位素标记技术得到了极大地重视和发展，并逐渐成为能与RIA相竞争的技术，尽管如此，放射免疫分析在现在免疫分析中仍占有较大的比例。1．2化学发光免疫分析法(Chemiluminescentlmmunoassay，CLIA)化学发光免疫分析法(CLIA)是建立在放射免疫分析技术(刚A)理论的基础上，以标记发光剂为示踪物信号建立起来的一种非放射标记免疫分析法，Halman[91等在1977