壳聚糖纳米粒基因递送系统的.研究

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1、硕士学位论文中文摘要泳分析表明制备方法对质粒基因没有破坏作用。壳聚糖纳米粒混悬液在一个小时内很稳定；在三个小时内纳米粒开始部分聚集，粒径变大。凝胶阻滞分析证明质粒基因几乎全部与壳聚糖结合。荧光扫描分析表明质粒基因绝大部分被包裹在纳米粒中，表面吸附较少。光电子能谱分析表明在纳米粒的表层存在质粒基因，综合以上结果可以推测基因壳聚糖纳米粒是一种“固态溶液”型结构。电性结合分析表明静电作用在纳米粒形成过程中占^有重要地位。一L／选用人胚胎肾细胞(HEK293)和肝癌细胞(HepG2)评价壳聚糖纳米粒的转染性能。／用倒置荧光显微镜观察和流

2、式细胞仪分析都证明壳聚糖纳＼米粒能够将质粒基因递送到细胞内并且基因获得表达，说明壳聚糖纳米粒用作基因递送载体具有可行性。随着细胞培养时间增加，基因转染效率和荧光强度分别在第3叫天和第2~3天达到最高，随后两者均减小。随着转染剂量增加，基因转染效率逐渐增加，但荧光强度在1-21xg时达到最高，随后减小。基因表达载体类型不同，基因转染效率不同。对于HEK293和HepG2细胞，在较优条件下测定的转染效率分别为41．44±1．23％和10．14±o．42％。与脂质体相比，壳聚糖纳米粒细胞毒性很小4

3、本论文研究结果表明壳聚糖纳米粒基因递

4、送系统安全、有效，在基因治疗领域具有广阔的应用前景。关键词：非病毒载体?基因递送；壳聚糖丫纳米粒；。质粒；复凝聚；中心组合设计；效应面法y模型拟合：转染：报告基因；绿色荧光蛋白：。堕主堂垡笙塞—————立墅!!堕曼一StudiesOnChitosanNanoparticlesGeneDeliverySystem(Abstract)M．SCandidate：HuangWeiSupervisor：ProfessorCuiGuang-huaTheresearchofgenemedicinewasonfocus．Thedevelopme

5、ntofgenedeliverysystemsWasthekeyofthegenemedicineresearch．Nowadays，genedeliverysystemsaremainlydividedintoviralvectorsandnon‘viralvectors．Althoughtheviralvectorshaveverystrongabilitiesofdeliveringgenes，therearesomeproblems，suchasimmunologicalresponse，pathologicalchan

6、geofcells，producingwildtypeviruseswhichmayhamperitsclinicalapplicationsafely．Thedevelopmentofnon—viralvectorsplayedaveryimportantroleinthefieldofgenedelivery．Non-viralvectorsCandeliverygeneexpressionsystem一--plasmidintocellsandplasmidCancontrolgeneexpression．Andthepr

7、oductsofgeneexpressionserve船drugs．Inpharmaceutics，non-viralvectorsmainlyincludeliposomes，complexes，microspheres，nanoparticlesandSOfbnll．Incomparison，nanopalticlesaleidealdeliverycarriersofgenesinvivoandhavemanyadvantages，suchas，1)nanoparticlesmadeofbiodegradematerial

8、sarenontoxicandbiocompatible．Theycannotinducebody’Simmunologicalresponse；2、nanoparticlesCancontrolgenereleaseandprolongthestaytimeofgeneinvivo；3)nanoparticlesmayCO-encapsulatedifferentgenesandmeanwhileincorporateothertranfectionfacilitatingagents；4)nanoparticlescanta

9、rgetingdeliverygenesanddecreasesideeffectofgenes；5)nanopalticlesCanbelyophilizeddirectlyandareeasytostorage．Thebiologicalfunctionof