notch1(nicd)过表达真核载体构建及对大鼠bmscs增殖分化的影响

《notch1(nicd)过表达真核载体构建及对大鼠bmscs增殖分化的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、天津医药2014年9月第42卷第9期883Notch1(NICD)过表达真核载体构建及对大鼠BMSCs增殖分化的影响112△33杜红阳李东宁付海燕包翠芬秦书俭【摘要】目的探讨过表达Notch1(NICD)基因对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖分化的影响。方法构建Notch1(NICD)过表达真核载体，实验分正常对照组（CON组，不做转染）、阳性对照组（空载体组，将质粒pEGFP-N1转染BMSCs）和转染组（将重组质粒pEGFP-N1-NICD转染BMSCs）。转染48h后观察细胞一般状态，Real-timePCR和Westernb

2、lotting检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和Notch1基因和蛋白表达，流式检测转染后细胞凋亡、细胞周期，MTT检测细胞增殖情况。结果重组质粒pEGFP-N1-NICD编码序列与设计完全一致。转染组和空载体组BMSCs均可表达绿色荧光。转染组GFAP、Notch1的基因和蛋白表达均高于CON组和空载体组（均P＜0.05），空载体组与CON组差异无统计学意义；各组间NSE的基因和蛋白表达差异无统计学意义。转染组存活细胞比率低于CON组和空载体组，早期细胞凋亡比率、晚期细胞凋亡比率均高于CON组和空载体组；

3、空载体组晚期细胞凋亡比率高于CON组。转染组细胞处于G1/G0期的比例高于CON组和空载体组，处于S期和G2/M期的比例低于CON组和空载体组（均P＜0.05）。除转染1d时各组MTTA490值差异无统计学意义外，其余时点转染组MTTA490值均低于CON组和空载体组（均P＜0.05）。结论高表达Notch1(NICD)基因可能在一定程度上诱导BMSCs凋亡、抑制其增殖，且表现诱导向神经胶质样细胞分化。【关键词】细胞增殖；细胞分化；转染；神经胶质原纤维酸性蛋白质；磷酸丙酮酸水合酶；Notch信号通路；骨髓间充质干细胞；诱导；Notch1(

4、NICD)【中图分类号】R349.5【文献标志码】A【DOI】10.3969/j.issn.0253-9896.2014.09.009ConstructionofNotch1(NICD)EukaryoticExpressionVectorandItsInfluenceontheProliferationandDifferentiationofRatBoneMarrowMesenchymalStemCellsinvitroDUHongyang1,LIDongning1，FUHaiyan2△,BAOCuifen3,QINShujian31De

5、partmentofDermatology,2ICUintheFirstAffiliatedHospitalofLiaoningMedicalUniversity,3DepartmentofAnatomy,LiaoningMedicalUniversity,Jinzhou121001,China△CorrespondingAuthorE-mail：4197123@163.com[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofconstructtheNotch1(NICD)eukaryoticexpre

6、ssionvectorontheproliferationanddifferentiationofratbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)invitro.MethodsRatBMSCswereexperimentedastheobject.NICDeukaryoticexpressionvectorwasconstructed.pEGFP-N1-NICDexpressingplasmidswereusedtotransfectBMSCs.Thestudyincludedcontrolgroup(CO

7、Ngroup),emptyvectorgroup(VECgroup)andthetrans⁃fectiongroup(TRAgroup).After48-hourtransfection,BMSCswereobservedforgeneralmorphology.Theproteinexpres⁃sionsofNSE,GFAPandNotch1weredetectedbyreal-timePCRandWesternblottingassayrespectively.Theapoptosis,cy⁃cledistributionandcel

8、lproliferationwereevaluatedbyflowcytometryandMTTassay.ResultsTheDNAsequencingcon⁃firmedthatthepE