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1、第24卷第6期西 安 交 通 大 学 学 报 ( 医 学 版 )Vol.24No.62003年12月JournalofXipanJiaotongUniversity(MedicalSciences)Dec.2003◇论 著◇Anti2CD3scFv2B7.1真核表达载体的构建及在COS27细胞中的初步表达1,21111杨章民,孔令洪,来宝长,王一理,司履生(1.西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所,陕西西安 710061;2.陕西师范大学生命科学院,陕西西安 710062)摘要:目的 构建anti2CD3scFv2B7.1真核表达载体,并进
2、行初步表达。方法 采用重叠延伸拼接法(splicingbyoverlapextention,SOE)将anti2CD3scFv和B7.1(V+C)两个基因片段通过spacer序列连接,将融合基因克隆入T载体,并测序证实。在此基础上构建真核表达载体pcDNA/anti2CD3scFv2B7.1,并经脂质体法转染COS27细胞,免疫组织化学法检测表达。结果 获得了序列与预期完全相同的融合基因;构建了抗CD3scFv2B7.1融合基因真核表达载体;在COS27细胞中获得初步表达。结论 成功构建及表达抗CD3scFv2B7.1融合基因真核表达载体,为进一
3、步研究抗CD3scFv2B7.1双功能分子的生物学活性及用于肿瘤生物治疗奠定了基础。关键词:抗CD3单链抗体;B721;重叠延伸拼接法;真核表达中图分类号:Q784;Q786文献标识码:A文章编号:167128259(2003)0620542203Constructionofanti2CD3scFv2B7.1eukaryoticexpressionvectorandpreliminaryexpressioninCOS27cellsYangZhangmin,KongLinghong,LaiBaochang,WangYili,SiLüsheng(In
4、stituteforCancerResearch,CollegeofLifeScienceandTechnology,Xi’anJiaotongUniversity,Xi’an710061,China)ABSTRACT:ObjectiveToconstructeukaryoticexpressionvectorbearinganti2CD3scFv2B7.1fusiongeneforthefunctionalinvestigationofthefusionprotein.MethodsTwoDNAfragments,anti2CD3scFvand
5、B7.1(V+C),werelinkedthroughaspacer,assembledintoafusiongenebySOE(splicingbyoverlapextention)methodandclonedintoT2vector.Basedonthisfusion,eukaryoticexpressionvectorpcDNA/anti2CD3scFv2B7.1wasthencon2structed.LipofectionstrategywassubsequentlyadoptedfortheCOS27transfectionandfu
6、sionproteinwasdetectedbyimmunohistochemistry.ResultsRecombinantvectorpcDNA/anti2CD3scFv2B7.1wasobtainedanditsprelimi2naryexpressionwasobservedinCOS27.ConclusionThesuccessfulconstructionandexpressionofpcDNA/anti2CD3scFv2B7.1haslaidfoundationforfurtherstudyonitsbiologicalactivi
7、ties,functionalassaysandevenfortumorbiotherapy.KEYWORDS:anti2CD3singlechainFvantibodies(anti2CD3scFv);B7.1;splicingbyoverlapextention(SOE);eukaryoticexpression 基于T细胞的肿瘤免疫治疗策略一直是肿瘤免anti2CD3scFv)为基础构建双功能分子用于抗肿瘤、2疫研究的热点之一。活化的T细胞通常是以MHC抗HIV研究在国内外已屡见报道,以具有共刺激Ⅰ限制性方式杀伤肿瘤细胞,而用基因工程构建
8、的功能的B7.1分子为基础的融合蛋白或基因修饰瘤3双功能抗体靶向的T细胞以非MHC限制性的方式苗方面的研究也时有报道,但抗CD3单链抗体
