肾素(前体)受体系统致人静脉内皮细胞损伤机制的分析

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1、扰(P)RR后对ERKl／2及p38MAPKs信号通路蛋白表达、血管细胞间粘附分子(vascularcelladhesionmolecule—l，VCAM一1)蛋白表达及超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)浓度的影响，从而探讨其致HUVECs损伤的机制，阐述其与动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)等伴有血管内皮损伤性心血管疾病的关系。方法：1．体外培养原代HUVECs，CD34流式细胞鉴定。2．在HUVECs中以siRNA干扰(P)RR，用RT-PCR方法检测干扰24，48及72小时后(P)RR的mRNA表达，确定干扰效率最

2、佳时间点。3．以奥美沙坦和PDl23319阻断Ang．II受体ATl、AT2。分别以人重组肾素(renin)及肾素前体(prorenin)处理HUVECs，于处理后5，10，20，35，60，90分钟收取蛋白，用westernblot法检测ERKl／2及p38信号通路蛋白磷酸化程度，确定肾素及其前体刺激致两信号通路蛋白磷酸化的最强时间点。4．以奥美沙坦和PDl23319处理HUVECs30分钟后，分别以人重组肾素及肾素前体刺激HUVECs，分别用westernblot法，ELISA法和比色法观察肾素及其前体是否可使信号通路蛋白ERKl／2及p38磷酸化增强、粘附分子V

3、CAM．1表达增高、抗氧化酶SOD含量降低，以及干扰(P)RR表达后是否可阻断或减弱肾素及其前体的上述作用。结果：1．CD34流式细胞鉴定，HUVECs百分率达98．35％。2．RT-PCR结果证实(P)RR的mRNA在HUVECs中有表达，siRNA干扰(P)RR后72小时，(P)RRmRNA在HUVECs中表达最弱。3．经肾素前体及肾素处理HUVECs后，信号通路蛋白ERKl／2及p38磷酸化水平增强，在肾素作用于细胞后20分钟，ERK及p38磷酸化程度最强；分别在肾素前体作用于细胞后60分钟及35分钟，ERK及p38磷酸化最强。4．人重组肾素及肾素前体刺激HUV

4、ECs，可增高信号通路蛋白ERKl／2及p38磷酸化水平，上调粘附分子VCAM．1表达，降低抗氧化酶SOD含量。干扰(P)RR后上述作用减弱。结论：(P)RR存在于HUVECs中。在HUVECs中，肾素及其前体通过(P)RR途径可减少抗氧化酶SOD含量，同时激活ERKl／2及p38MAPKs信号通路，上调炎症因子VCAM．1蛋白表达，从而引起内皮细胞损伤，导致2AS等相关疾病的发生。干扰(P)RR表达，可有效抑制以上作用，发挥内皮保护作用，为临床治疗RAS过度激活所致的伴有内皮损伤的疾病提供新的理论依据。关键词：人脐静脉内皮细胞肾素(前体)受体MAPKsVCAM．1S

5、ODDamagemechanismof(pro)reninreceptorsystemtohumanumbilicalveinendotheliaIcellsMasterdegreecandidate：LiliRenSupervisor：ProfessorYinongJiang．Vice—supervisor：AssociateProfessorYanLuMajor：InternalMedicineAbstractInrecentyears，ithasbeenprovedthat(pro)renninreceptor((P)RR)isanewactivesubstan

6、ceinreninangitensinsystem(RAS)．Twotypesof(pro)reninreceptorhavebeencloneduntildate，oneismainnose．6．phosphate／insulin．1ikegrowthfactorIIreceptor(M6P／IGF2R)whichthoughttObeinvolvedintheclearmechanismsof(pro)renin，theotheriSthefunctionalreceptor(P)RR．Nowsdays，moreandmoreattentionhasbeenpai

7、dtO(P)RRintheheartandkidneydisease．Itwasconfirmedthat(P)RRexistsintherenalmesangialcells，vascularsmoothmusclecells，kidney，heart，brainandothercellsandtissues．(Pro)reninreceptor-boundproreninandreninactivatestheintracellularsignalingpathwaysindependentofthegeneratedangiotensinII(