肾素（前体）受体在h9c2心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及机制研究

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1、大连医科大学博士毕业论文中图分类号密级肾素(前体)受体在H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤中的计：学位论文：93页表格：9个插图：18幅作用及机制研究刘岩指导教师：姜一农教授申请学位级别：博士学位学科(专业)：内科学培养单位：大连医科大学附属第一医院完成时间：二O一四年三月答辩委员会主席：大连医科大学博士毕业论文独创性声明l

2、IIIIBillIIIIIIIIIIlUIY2587033本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在指导教师指导下进行的研究工作及所取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含

3、其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：——年一月——日大连医科大学博士毕业论文关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等

4、复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)：1．保密口，在一年解密后适用本授权书。2．不保密口。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日大连医科大学博士毕业论文目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1l第一部分缺氧复氧导致肾素(前体)受体在H9c2胚胎大鼠心肌细胞中的表

5、达变化(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11(一)月Ⅱ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．¨(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．111、实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．112、H9c2细胞培养及传代⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．143、免疫细胞化学方法和步骤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯144、免疫荧光方法和步骤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯155、RT·PCR检测(P)RRmRNA表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯166、siRNA干扰实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯187、Real-TimePCR检N(P)RRmRNA的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．198、心肌细胞缺氧／复氧模型的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯219、实验分组⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。2110、Westernblot方法测定(P)RR蛋白表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．．21(--)数据统计方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23(四)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231、(P)RR在H9c

7、2胚胎大鼠心肌细胞中的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．23大连医科大学博士毕业论文2、(P)RR干扰的效率检测结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．243、缺氧复氧致(P)RR蛋白表达的变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25(五)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．26(六)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．29(七)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．30第二部分缺氧复氧致H9c2心肌细胞凋亡及炎症因子表达增加(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯35(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．351、实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．352、H9c2细胞培养及传代⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯373、心肌细胞缺氧／复氧模型的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯384、AnnexinV．FITC／PI双染法检测细胞凋亡步骤⋯⋯⋯⋯⋯⋯385、Westernblot方法检测Caspase．3蛋白表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．386、ELISA方法测定炎症因子表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．40(三)数据统计方法⋯⋯⋯⋯⋯

9、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41(四)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯411、AnnexinV．FITC／PI法检测缺氧复氧组H9c2细胞凋亡率⋯⋯．．412、缺氧复氧致H9c2细胞Caspase．3蛋白表达水平增加⋯⋯⋯⋯．．423、缺氧复氧致H9c2细胞分泌炎症因子增加⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43(五)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43(六)结论⋯⋯