大肠埃希菌等质粒介导的喹诺酮类耐药基因检测与耐药性的研究

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1、r^’^一l。t、：。目录1IllIIilllllll111IIlltltlIlll＼1801773中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4研究论文大肠埃希菌等质粒介导的喹诺酮类耐药基因检测及耐药性研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7月O吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯’7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯．．13附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．15附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．32致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．40个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．41主塞垫璺大肠埃希菌等质粒介导的喹诺酮

3、类耐药基因检测及耐药性研究摘要目的：质粒介导的喹诺酮类耐药(plasmid—mediatedquinoloneresistance，PMQR)是近几年来发现的耐药机制，主要由耐药基因qnr(quinoloneresistance)介导。本文通过对临床分离超广谱B一内酰胺酶(ESBLs)或AmpCB一内酰胺酶(AmpC酶)大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中3类(qnr、aac(67)一Ib—am、qepA)PMQR基因的检测，以了解PMQR基因的流行特征及对16种抗生素的耐药特点，为控制PMQR菌感染提供资料。方法：1肠杆菌科细菌的分离与鉴定324株大肠埃

4、希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌分离于河北医科大学第二医院、河北医科大学第四医院、白求恩国际和平医院、石家庄市第一人民医院、保定徐水人民医院、沧州市第一人民医院及石家庄市中心医院。其中大肠埃希菌139株，肺炎克雷伯菌108株、阴沟肠杆菌77株。标本来源：痰液140株、尿液77株、血液18株、分泌物17株、穿刺液7株、脑脊液5株以及其它标本60株。对收集到的菌株先转种于血琼脂培养基上，再用肠杆菌科鉴定系统APl20E进行复核鉴定，确保鉴定菌株种属的准确性。2细菌的耐药性及耐药酶的检测对分离的菌株采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行了16种抗菌药物的敏感性测定

5、；采用双纸片协同试验检测了ESBLs携带情况，采用抗菌药物及抑制剂组合耐药表型筛选法检测了AmpC酶的携带情况。’3qnr基因的检测采用聚合酶链反应(PCR)方法，对产ESBLs或AmpC13一内酰胺酶的菌株进行喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qnrC、aac(6’)一Ib—cr、qepA检测，对琼脂糖凝胶电泳阳性产物进行测序，测序结果应用GenBanK-Blast、Dnaman软件上网比对，确认所测基因。结果：1大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌产ESBLs或AmpC酶的检士塞垫璺测324株细菌产ESBLs或AmpC酶共115株，其中29．

6、3％为单产ESBLs酶，2．79％为单产AmpC酶，3．40％为产ESBLs+AmpC酶。115株产酶菌的构成比为：大肠埃希茵中37．4％为单产ESBLs、1．44％为单产AmpC酶、4．31％为产ESBLs+AmpC酶；肺炎克雷伯菌中30．5％为单产ESBLs、1．85％为单产AmpC酶、0．92％为产ESBLs+AmpC酶：阴沟肠杆菌中13．0％为单产ESBLs酶、6．49％为单产AmpC酶、5．19％为产ESBLs+AmpC酶。2产ESBLs、AmpC酶的菌株对16种抗生素的耐药情况115株产酶菌对环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率分别为86．1％和70．9

7、％对第一、二、三、四代头孢的耐药率均在80％以上，对于B一内酰胺酶抑制剂合剂中的头孢哌酮／舒巴坦耐药率较低，为14．1％、哌拉西林／他唑巴坦和阿莫西林／克拉维酸的耐药率分别为18．8％和29．6％。对氨基糖甙类抗生素阿米卡星和庆大霉素的耐药率分别为30．4％幂N73．9％。亚胺培南、美罗培南的耐药率为O。3qnr阳性菌株在产ESBLs或AmpCB一内酰胺酶大肠埃希菌、肺炎克伯菌和阴沟肠杆菌的分布情况115株产ESBLs或AmpC13一内酰胺酶大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌我们共检测到18株qnr基因阳性菌株。在阳性菌株中大肠埃希菌2株(1．73％)，其

8、中1株为痰标本，另1株为血标本；肺炎克雷伯菌12株(