il1β对体外海马神经干细胞增殖与分化的影响

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1、汕头大学硕士研究生论文目录目录…………………………………………………………………………………Ⅰ中文摘要……………………………………………………………………………Ⅱ英文摘要……………………………………………………………………………Ⅸ缩略词………………………………………………………………………………ⅩⅥ一、前言………………………………………………………………………………1二、材料和方法…………………………………………………………………………4三、实验结果………………………………………………………………………12四、讨论…………………………………………………

2、………………………29五、总结…………………………………………………………………………37参考文献……………………………………………………………………………38文献综述…………………………………………………………………………41个人简历………………………………………………………………………………47致谢………………………………………………………………………………48I汕头大学硕士研究生论文摘要背景和目的抑郁的发病机制尚不清楚，关于抑郁的病因也有很多种理论假说，其中海马神经元的损伤和再生障碍在抑郁的发病过程中越来越受重视。海马是大脑中神经元可再生的重要区

3、域之一，海马中的神经干细胞(Neuralstemcells,NSCs)是神经元的前体细胞，对于神经元的数量再生与维持有重要影响。体外实验表明炎性细胞因子白介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)能抑制海马神经祖细胞的增殖，因此，研究IL-1β在抑郁症发病过程中的作用和机制，不仅有利于揭示抑郁症的发病机制，也将为开发新型抗抑郁药物提供新的靶点。本课题组前期的研究成果证明：腹腔注射脂多糖、腹腔注射利血平均可引起大鼠的行为性抑郁，同时脑内不同区域的细胞因子IL-1β的升高，脑内注射IL-1β受体拮抗剂可以部分改善这种行为性抑郁，给予腺苷受

4、体拮抗剂咖啡因和A2A受体拮抗剂可以部分逆转这种行为性抑郁；脑室内注射IL-1β可以诱导大鼠的行为性抑郁；体外IL-1β能剂量依赖性的抑制海马神经元的活性，降低BDNF表达,CREB-BDNF通路可能在其中有着至关重要的作用，NMDAR可能参与其中。上述研究表明IL-1β与行为性抑郁有着密切的关系，关于其分子生物学机制可能与抑制脑源性神经生长因子﹙BDNF)的表达降低有关。本实验拟进一步探究IL-1β对于神经元的前体细胞－神经干细胞活性的影响及其机制，并研究A2A受体及NMDA受体在其中的作用，以及IL-1β对于神经干细胞分化成神经元和星形胶质细胞的影

5、响。材料和方法1.海马神经干细胞的培养、鉴定24h内SD大鼠新生鼠3－4只，断头取脑，分离两侧海马，机械吹打成为单细胞悬液，加入含10%FBS的DMEM/F12培养液，置入37℃、5％CO2培养箱30min，去除为成纤维细胞，24h后弃掉上清液，重新加入含10%FBS的DMEM/F12新鲜培养液培养72h，离心II汕头大学硕士研究生论文弃掉上清液，换用神经干细胞培养液(含2%B27、20ng/mlbFGF及20ng/mlEGF的DMEM/F12培养液)，3－4天换液，7－8天传代一次。连续纯化培养约21天，以作实验用材。神经干细胞高度选择性单克隆抗体N

6、estin(巢蛋白)行免疫细胞化学﹙immunocytochemistry,ICC)鉴定。2.IL-1β对神经干细胞增殖的影响及机制以IL-1β孵育神经干细胞3天换液并取出一半细胞，测细胞活性。剩余细胞再补足新鲜培养液及药物继续孵育3天取出全部的细胞，MTT法测细胞活性。以不同浓度的IL-1β孵育神经干细胞3天，收集上清液以ELISA试剂盒测其上清液中的BDNF浓度。以10ng/mlIL-1β孵育神经干细胞，同时加入NMDA受体拮抗剂MK-801或者A2A受体拮抗剂MSX-3，共同孵育3天，取出全部的细胞，MTT法测细胞活性。3.咖啡因及NGF对神经干

7、细胞增殖的影响以咖啡因,NGF孵育神经干细胞3天，换液并取出一半细胞，测细胞活性。剩余细胞再补足新鲜培养液及药物，继续孵育3天取出全部的细胞，MTT法测细胞活性。4.IL-1β对神经干细胞分化成星形胶质细胞和神经元的影响多聚赖氨酸铺板，调整神经干细胞的密度，10%FBS+正常神经干细胞培养液加入不同实验浓度IL-1β(0、5、10、20)ng/ml分化3天，换液继续分化培养，共6天，去除上清液，分别用GFAP和β－TubulinⅢ行荧光免疫细胞化学染色计数以及用流式细胞仪检测星形胶质细胞和神经元的比例。5.统计方法应用Excel2003和SPSS17.

8、0统计软件进行统计分析。结果以均数±标准差(x±SD)表示，采用方差分析进行比较，以P＜=0.