荧光定量pcr测定鼻咽癌患者血清中游离的ebv-dna

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1、福建医科大学硕士学位论文荧光定量PCR测定鼻咽癌患者血清中游离的EBV-DNA姓名：李振华申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：欧启水20090301荧光定量PCR测定鼻咽癌患者血清中游离的EBV-DNA中文摘要【摘要】目的建立FQ—PCR(real．timeFluorescentQuantitativePCR)系统，定量检测鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)患者血清中游离的EBV(EpsteinBarrVirus，EBV)一DNA，探索EBV—DNA用于NPC的诊断、预后判断及疗效判断的价值。方法收集101例鼻咽癌患者和

2、49例正常对照者血清作为检测标本。101例患者中I期3例，II期11例，III期39例，Ⅳ期48例。根据鼻咽癌患者血清中游离的EBV—DNA基因全序列设计引物和探针，PCR扩增EBV-DNABamHI—W基因片段，并将其克隆到pGEM．TEasy载体上，构建质粒标准品；建立FQ．PCR体系。用已建立的荧光定量PCR方法对EBV-DNA含量进行定量检测所有标本。同时采用酶联免疫吸附法测定血清EBV衣壳抗原的IgA抗体(Igh／VCh)。结果1、NPC患者治疗前血清EBV—DNA平均浓度为58400copies／ml和阳性检出率为90．6％(91／101)，患者治疗

3、后血清EBV-DNA平均浓度为(1243．36copies／ml，18．75％8／44)和正常人血清EBV—DNA水平平均浓度为Ocopies／ml和检出率分别为096(0／49)。NPC患者治疗前血清EBV—DNA水平显著高于治疗后和正常人(P均<0．01)。NPC患者治疗前血清EBV—DNA阳性检出率显著高于治疗后和正常人(尸均小于0．05)。NPC患者治疗后血清EBV-DNA水平和检出率与正常人比较，差异均无显著意义(Mann—WhitneyU检验，P=O．256：卡方检验，P=O．223)。血清VCA／IgA抗体阳性率为83．1％(84／101)明显高于

4、正常对照组(4．1％，2／49)。鼻咽癌患者EBV—DNA水平阳性率90．6％，同时血清VCA—Igh的阳性率为83．1％，DNA检测灵敏度略高于VCA／IgA检测。2、IⅡ一Ⅳ期鼻咽癌患者的血清EBV—DNA阳性率(89．7％，35／39；89．6％，43／48)较I—II(72．7％8／11)期患者为高，有显著性差异(P<0．01)。NPC患者治疗前血清EBV—DNA水平随临床TNM分期越晚而显著增高。I期为3390±1540copies／ml，II期为11802±5603copies／ml，II]期为56488±27234copies／ml，IV期为722

5、275±321351copies／ml，Kruskal—WallisH检验分析结果显示各临床分期间的鼻咽癌患者血清中游离EBV-DNA的平均拷贝数均有显著性差异(P(O．005)。3、鼻咽癌患者治疗前血清VCA／IgAs／co平均值为3．8158(S／CO>1为阳性，<1为阴性)，略高于治疗后平均值3．1261(尸>0．05)差别无显著意义。但明显高于正常对照组0．7318(P

6、、m1)(P

7、ithnasopharyngealcarcinomaabstract[Abstract]objectiveToconstructquantitativeanalysisofcell-freeEpstein—Barrvirus(EBV)DNAlevelsinseruminnasopharyngealcarcinoma(NPC)，InordertoexplorethevaluableofEBV—DNAlevelsintheserumofnasopharyngealcarcinomapatients谢thdiagnose，predictionprognosticati

8、on，therapeut