3株禽2型副黏病毒分离鉴定和生物学特性初步分析

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1、万方数据Secrecy：No．ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationIsolation，IdentificationandPreliminaryCharacterizationofThreeAvianParamyxovirusType2IsolatesM．S．Candidate：TanQunsongSupervisor：Prof．WangJingfeiDegree：MasterofVeterinaryMedicineSpecialty：VeterinaryMed

2、icineMay2015万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导F进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所傲的任何贡献均已往论文中作I：：r明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：w1_t年1．5-．关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即；中国农业科学院有权保留送交论文的复印{孛和

3、磁盘．允许论文被奁阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意t}，网农业科学院可以ffjl4；同方式往不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。时阮wlJ"旬：／jj上日时矧：矽少年乡粥』一日松侈粉砒万方数据中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目3株禽2型副黏病毒的分离鉴定与生物学特性初步分析动物传染病及癌论文作者檀群松专业兽医研究方向原分子流行病学指导教师王靖飞培养单位(研究所)哈尔滨兽医研究所硕(博)姓名职称单位专业签名导师评刘宗平研究员硕晕口扬州大学临床兽医学＼＼

4、阅博导团人封文海教授硕导口中国农业大学分子病毒学＼＼博导涵与免疫学必广1辩硕导口东北农业大学预防兽医学c榴主华育平教授博导团席硕导口臃狄阁思民教授西北农林科技大学预防兽医学博导涩硕导口中国农业科学院哈尔

5、》嘲夕仇华吉研究员预防兽医学博导透滨兽医研究所答硕导口中国农业科学院哈尔预防兽医学易镦蔡雪辉研究员博导团滨兽医研究所辩柃红j孙元副研究硕导嗣中国农业科学院晗尔预防兽医学贝博导目滨兽医研究所委硕导口博导口员硕导口博导口预导口溥导口会议记录(秘书)王刚论文答辩时间地点2015年5月25日参楼学术报告厅3l7万方数据摘要副黏

6、病毒是在人和动物中广泛存在的一类病毒，其中的一些成员可以引起人和动物的严重发病，造成严重的公共卫生事件及重大的经济损失。2013年，在黑龙江省开展的野乌中禽流感病毒的监测中，我们在大兴安岭及绥棱两个地区的野鸟样品中发现了3个有血凝活性，却不含禽流感和新城疫病毒的样品，为鉴定这些样品中可能存在的病原，我们开展了以下实验：首先，收集3个样品尿囊液及利用差速离心法处理后，分别取出100此制各电子显微镜负染色样品并在电镜下观察。在这3个样品中均观察到副黏病毒样粒子：直径为150～200nlTI，有囊膜且可见线性核酸。随后，分别

7、提取了这些样品的核酸，利用随机引物对其进行扩增并测序，分析结果显示3个样品均含与禽2型副黏病毒基因组片段有较高的相似性(71～92％)的基因片段，表明3个样品中所含的病毒粒子与禽2型副黏病毒存在同源性。为进一步鉴定这些病毒，我们将3个样品并分别与NDV和APMV-2多克隆抗体进行血凝抑制试验，结果表明NDV阳性血清对3个病毒有低的抑制活性(23)而APMV-2多克隆抗体对3个抗原物质有较高的血凝抑制活性(29)。通过以上实验，我们初步鉴定这3株病毒为禽2型副黏病毒，并分别命名为APMV-2／Emberizaspodoc

8、ephala／China／Daxing’anfin晷／974／2013(APMV-2／Daxing’anling／974)，APMV-2／Procarduelisnipalensis／ChinalSuifing／53／2013(APMV-2／Suiiing／53)，及APMV-2／Anthusrufulus／China／Suifiwj’106／2013(APMV-2／Suiling／106)。由于我国还没有有关野鸟中禽2型副黏病毒的报道，我们对这3株病毒的全基因组进行了测定。根据Genl劫mk中下载的2型副黏病毒的基因

9、组序列及随机扩增的结果，设计了对这3株病毒全基因组测序的引物，对其基因组序列进行了测定。测序结果表明3株病毒基因组序列全长均为15000nt，按照5’一N．P．M-F．HN．L．3’顺序编码六个非重叠基因，基因组全长遵循“六拷贝原则”。这3株分离株的全基因组序列与其他禽2型副黏病毒的基因组序列相似性为75．8～80．2％，与APM