骨髓间充质干细胞促进肝大部切除大鼠肝再生的研究

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1、福建医科大掌2007级硕士研究生毕业论文骨髓间充质干细胞促进肝大部切除大鼠肝再生的研究摘要目的：(1)探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)标记和示踪方法，优化示踪技术；(2)观察不同途径移植的骨髓间充质干细胞在肝大部切除大鼠剩余肝内定植及促进肝再生的作用。方法：(1)体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，通过流式细胞仪鉴定间充质干细胞表面抗原(CD29、CD34、CD45、CD90)，分别用BrdU、DAPI以及GFP3种方法标记干细胞，BrdU标记率通过细胞免疫化学鉴定，

2、DAPI和GFP标记率直接通过荧光显微镜进行鉴定，对比观察三种示踪技术的优缺点。(2)建立肝大部切除(约70％)大鼠模型，分别经尾静脉和门静脉向肝切除大鼠移植DAPI标记的第三代骨髓间充质干细胞约1．5×106，单纯肝大部切除组作对照组，分别于术后3天、9天采血检测肝功能，9天后处死大鼠，取肝脏标本，免疫组织化学方法观察肝内Ki-67的表达及BrdUBH性细胞，并通过荧光显微镜观察两种移植途径对大鼠骨髓问充质干细胞向肝脏迁移的影响。结果：(1)流式细胞仪鉴定结果显示骨髓问充质干细胞CD29、CD90表达阳性

3、，CD34、CD45表达呈阴性。3种标记方法对细胞均未显示明显毒性。终浓度为10umol／L及标记48h、终浓度为1ug／ml及标记12h时分别为BrdU和DAPI的最佳标记浓度及时间。感染复数MOI=8时，GFP慢病毒感染MSCsl2h，感染率可达90％以上；(2)尾静脉移植组和门静脉移植组9天后肝功能显示ALB升高，且其差异有统计学意义(均P

4、dU阳性细胞(15．92±3．06，16．01±3．32VS11．63±3．74个细胞／400倍视野)升高，与对照组比较差异均具有统计学意义(均尺O．05)；DAPI标记阳性的细胞在门静脉移植组(18．1±3．4个细胞／100倍视野)多于尾静脉移植组(7．6±2．0个细胞／100倍视野)，差异有统计学意义(尺0．05)。结论：(1)GFP基因转染骨髓间充质干细胞，是一种明确、稳定的标记细胞的方法，对成体干细胞的示踪有重要意义；(2)经尾静脉及门静脉向肝大部切除大鼠输注MSCs，可以促进肝再生，但尾静脉移植途

5、径肝内定值的MSCs少于门静脉移植。福建医科大学2007级硕士研究生毕业‘沦文关键词：骨髓间充质干细胞示踪BrdUDAPIGFP肝切除细胞移植肝再生门静脉尾静脉6福建医年申大掌2007圾司I士研究生毕业论文何秀华EffectofbonemarrowmesenchymalstemcellsonliverregenerationaftermajorhepatectomyinratsAbstractobjectives：(1)Toinvestigatelabelingandtracingmethodsofbone

6、marrowmesenchymalstemcells(MSCs)，andoptimizetracertechnique；(2)Toobservethehomingcapacityandtheeffectsonliverregenerationofbonemarrowmesenchymalstemcellsintheratremnantliveraftermajorhepatectomybydifferenttransplantationapproach．Methods：(1)RatbonemarrowMSC

7、swereisolatedandculturedinvitro．Thesurfaceantigens(CD29，CD34，CD45，CD90)ofMSCswereidentifiedbyflowcytometry．MSCswerelabeledwithBrdU，DAPIandGFP,respectively．ThelabelingefficiencyofBrdUwascalculatedwithimmunocytochemistry,andthoseofDAPIandGFPwereobservedunder

8、fluorescencemicroscope．Theadvantagesanddisadvantagesofthreetracertechniqueswerecompared．(2)Bonemarrowmesenchymalstemcells(about1．5x106eachrat)labeledwithDAPlwereinjectedintothecaudalorportalveinofratwith70％ma