新型荧光试剂的合成及标记方法研究

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1、Abs仃甚clAbstractLinzhang(A且a1)rticaJChemis仃y)Dh‘ectedbyPro￡YukuiZhangandPro￡LmuaZhangDeriVatizationWimnuorescentmoleculesjsanjrnponantwayofincreasingthedetectionsensitivityofchmmatP疆∞茔薹警薹{§攀；；；i錾琴；3}#i目惟鳃毒害一冀i蠹连曼警苎1芎l阜豪壬兰铲；霹I耋≤墓藩；蚕l辇基§蓬薹噩?。鐾冀篷圈；嚏_掌；蠛薯ll翻l融蔓哺羹耋；j孽}箨南s鸶耋n’自}；耋耋薹；t割剿鐾：二署血匿塞

2、’醇阡“薹蓥地誊蕃!主蓦萼l壬塞瞬藿藕i薹毫事量；耍薹茎．2基1i霎羹墓l剑咄i各董耋蠢鞋j}非哲lll{诣砷冀j廷莲¨∈目日ft蠹掣H；墓囊i；雾笔薹浔亡季i薹耋、?Col眦n250×4．6mm(i．d)HypersilBDS(5岬)；流速=1．OmLmin一1，流动相A：水，流动相B：乙腈；梯度条件：0～406．1．3．2光谱分析"xAbsnacttaggingreagenls，respectiVely．Thereactionscallbecarriedoutinwater_bathalldfinjshed__vit王lin30minforfomaldehyde．

3、Theaveragedetectionlimnsofthesaccharidesandfbrmaldehydearc35fmola11d9．8fmoI，respectively．BDETsand9一(2一hydroxylenlyl)一acridone(HEA)，“怕fluorescencelabelingreagentsforcaIboxyliccompounds，havebeenmilizedfortheanalysisof1Obileacids．Thederivatizationconditionshavebeeninvestigatedandmerelevant

4、HPLCmethodshavebeensetup．TheconditionsofderivatizationreactionarereIativelymiJd．TheaveragedetectionIimitsofbileacidsderivatizedbyHEAandBDETSare8．3矗noland149．1fmol，re"x第一章文献综述有机试剂在分析化学中占有与分析仪器同等重要的地位。荧光衍生化试剂则是有机分析试剂的一类重要分支。性能优良的荧光衍生化试剂已成为某些物质的高灵敏、高选择性分析的关键[1】。本章从荧光的基础理论、荧光标记试剂的构成和要求以及荧光标

5、记试剂的分类和应用等方面对荧光衍生化的HPLc方法进展加阻系统综述。第一节荧光的基础理论1．1．1荧光的发现和产生原理荧光现象是在16世纪就被发现的，但直到19世纪中期对荧光的产生条件和原理才清楚。1852年，stokes证实了荧光是物质吸收光后重新发射的光。吸收与荧光密切相关，由于碰撞和热的耗散使一部分能量丧失，所以荧光在更长的波长发射[2]。荧光产生的过程如图1．1．1[1，2]所示。分子中运动着的电子可以处于一系列不连续的能量状态(即能级中)，物质受光照射后，部分或全部地吸收入射光的能量。在此过程中，光子的能量便传递给物质分子，于是便发生电子从较低能级到较高能级

6、的跃迁。所吸收的光子能量等于跃迁所涉及的两个能级间的能量差。处于这种激发状态的分子，称为电子激发态分子。电子激发态的多重态用2针1表示，S为电子自旋量子数的代数和，其数值为O或1。S为O时，分子内轨道中的所有电子自旋配对，自旋方向相反，此时分子处于单线态。大多数有机物分子的基态是处于单重态的。倘若分子吸收能量后电子在跃迁过程中不发生自旋方向的变化，这时分子便处于激发的单熏态，So，sl，s2，分别表示分子的基态、第一和第二，⋯电子激发单重态；如果电子第一章文献综述3由以上图1．1．1可知，激发态分子发生荧光时所放出的能量比分子被激发时所吸收的能量小，所以荧光的发射波长

7、通常比激发波长稍微长些。荧光的产生决定于第一电子单线激发态的最低振动能级与基态的能量差异，而与分子原来被激发到哪个能级无关。因此，荧光发射光谱通常与激发波长无关。1．1．2荧光强度与荧光量子产率荧光强度是指在一定条件下仪器所测得荧光物质发射荧光大小的一种量度，物质吸收光越多，处于激发态的分子越多，发出的荧光强度就越大。荧光强度除与物质本身的荧光量子产率有关，还与介质、环境、仪器性能等因素有关。，，=2．303办厶曲c(1．1)矗为荧光强度；何为荧光量子产率；而为照射到被测物质上的光强度；s为该物质的摩尔吸光系数：6为检测池厚度；c为物质浓度。荧光量子