急性移植物抗宿主病对骨髓cd45nestin2b细胞数量的影响与机制

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1、”帅，t◇‘I”p一弘伪M．∥即，}、急性移植物抗宿主病对骨髓CD4S—NeStin+细胞数量的影响及机制初步研究@∽∥谢㈨管∥‘√。稚搿已写急性移植物抗宿主病对骨髓CD45。Nestin+细胞数量的影响及机制场所，支拄和调控造血干鲴慌胖删怕学磕b量包括多种细胞组分，Me’ndez—FerretS等认为，Nestin+细胞是niehe的重要细胞组分叠一，属于间充质干细胞，为交感神经调(旦三l臣上腺塞受丝上，罐晦预勋支持因子弋页广Cx∞l茼硼万磊面磊五元面石可磊丽磊而蕊丽勇荪诵而瓣育藓而衙盯葡磊际而石丽磊五丽匿丽而瓦葡瓦丽湎丽骨髓乏云i药蕊午面砬在骨髓有核细胞中的比例及绝

2、对数量的变化及变化机制，以寻找aGVHD所致造血功能障碍的原因，为进一步寻找aGVHD治疗手段、提高造血干细胞移植疗效奠定理论基础。第一部分方法取性流式细胞术检测骨髓有核细胞中CD45"Nestin+细胞的比例、绝对数量、细胞表型(间充质干细胞标记CD44、CD29、Sca-1，血管内皮标记VEGFR3，造血干／祖细胞标记c-Kit，主要组织相容复合物MHC．II)。实验结果以均数±标准差表示。结果，唑～渺小2纵从一l～小彳u‘“lkoP‘2位o‰小∥’№似‘第二军医大学硕士学位论文1、骨髓CD45一Nestin+细胞数量骨髓CD45-Nestin+细胞占骨髓有核细胞(

3、0．08±0．00)％，占CD45。细胞的(4±0．6)％，以每只小鼠骨髓有核细胞总数2．5x105计算，骨髓CD45-Nestin+细胞绝对数量约为(1．6+0)x105／只，为骨懿中一类稀有细胞。2、骨髓CD45"Nestin十细胞细胞表型骨髓CD45"Nestin+细胞高表达间充质干细胞的标记CD44(98．70-t1．49)％、CD29(84．88士13．57)％、Sca-1(89．9士3．50)％，不表达血管内皮的标记VEGFR3，不表达造血干／祖细胞标记c．Kit，不表达主要组织相容性复合物MHC．II。第二部分aGVHD时骨髓CD45"Nestin+细胞数

4、量的变化方法以8．10周龄雄性B6．SJL小鼠为供体，6—8周龄雌性CB6F1小鼠为受体，接受133Cs射线一次照射，总剂量为8Gy，构建半相合骨髓移植aGVHD模型、半相合单纯骨髓移植(Bonemarrowtransplantation，BMT)模型。aGVHD组每只受体小鼠移植骨髓有核细胞5x106和脾细胞6×101，BMT小鼠每只受体小鼠仅移植相同数量骨髓有核细胞5x106。移植后通过生存分析、观察aGVHD表现、靶器官病理、外周血血常规、骨髓有核细胞总数、供体细胞植入率、骨髓造血干／祖细胞绝对数量验证aGVHD、BMT模型构建成功。移植后+7天、+14天、+21

5、天流式细胞术分别检测aGVHD组和BMT组小鼠骨髓有核细胞中含有间充质干细胞的细胞群体(以CD45。C．Kit’CD44+CD29+设门)在骨髓有核细胞中比例、绝对数量，CD45"Nestin+细胞在骨髓有核细胞中比例、绝对数量。实验结果以均数±标准差表示。计量资料比较采用SPSS16．0软件包，进行非参数检验。生存资料比较通过黟印hpadprism5软件，进行Log．rank检验。检验水准a=O．05。．结果1、aGVHD组小鼠存在造血功能障碍移植后+7天，aGVHD组和BMT组受鼠外周血三系均达低谷，此后逐渐恢复，aGVHD组三系恢复较BMT组快，但移植后+21忝垄

6、查：堑娑旦组处周血三盔毯趟期鹳嘴茅时为·丞菩低手兽ML组：善植后+7天、+14天、+21天aGVHD组全骨髓有核细胞总数、供体细胞植入率、供体来源造血干细胞(HSC)、造血祖细胞(HPC)绝对数量均低于BMT组。2、aGVHD时骨髓含有间充质干细胞的细胞群体在骨髓有核细胞中比例未减少，但绝对数量减少移植后+7天、+14天、+21天aGVHD组骨髓含有间充质干细胞的细胞群体(以CD45。C．Kit-CD44+CD29+设门)在骨髓有核细胞中比例与BMT组无显著差异，但绝对数量低于BMT组『移植后+7天：(3．63．-0．66)x105VS(7．754-2．08)×105户

7、0．05；移植后+14天：(4．44-0)x105VS(12．84-1．73)×105，P=0．034；移植后+21天：(1．84-1．08)x105VS(25．47士9．63)x105，P=0．051。移∥盎璺：：+芝琏‰3、aGVHD植后+7天、移比例低于BMT组[移植后+7天：(0．0366士0．004)％VS(O．071士0．01)％，P=O．008；移植后+14天：(O．027士0．007)％VS(0．0544-0．013)％，P--0．008：移植后十21天：(0．019-士0．004)％VS(O．053士0．006)％，P=