外周血干细胞骨髓腔内输注对移植物抗宿主病的影响论文

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时间:2018-07-07

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1、外周血干细胞骨髓腔内输注对移植物抗宿主病的影响论文毕延智,曾冬香,盛桂凤,张琰,陈宝安【摘要】本研究建立髓腔内外周造血干细胞输注(IBMPBSCT)动物移植模型并观察该方法对移植物抗宿主病(GVHD)的影响。选取雌性C57BL/6小鼠为移植受鼠,于第0天接受全身照射(TBI)4Gy后,输注经rhGCSF动员的雄性BABL/c小鼠外周血造血干细胞(1×107),2天后腹腔注射环磷酰胺(CTX),观察各组小鼠GVHD发生情况。结果显示:髓腔内PBSCT组的受鼠GVHD发生率较尾静脉输注组明显减低(p0.05),移植后在受鼠体内观察到供鼠来源的Y染色体存在。结论

2、:与尾静脉输注比较,髓腔内输注外周血造血干细胞不仅能减少GVHD的发生,而且更有利于干细胞植入。【关键词】移植物抗宿主病InfluenceofIntraboneMarroatopoieticStemCellsonGraftVersusHostDiseaseAbstractThisstudyedtoexplorearroatopoieticstemcells.FemaleC57BL/6miceasrecipientsreceivedtotalbodyirradiation(TBI)4Gyonday0,folloatopoieticstemcells(1×1

3、07)frommobilizedmaleBALB/culatingfactor(rhGCSF),andcyclophosphamide(200mg/kg)oreloosomeofdoenormicecouldbedetectedinthebonemarroice.Itisconcludedthatthemethodofintrabonemarroentofhematopoieticstemcellsintermsofstemcellhomingicedecrease.Keyatopoieticstemcelltransplantation;intrabo

4、nemarromol/l的PBS液漂洗2次后重悬细胞,调至所需细胞浓度1×109/ml和1×108/ml分别用于髓腔内移植和尾静脉移植。移植模型建立C57BL/6小鼠在移植前1周接受含红霉素(250mg/L)和庆大霉素(320mg/L)的饮水,并持续到移植后2周。移植当天受鼠接受60Coγ射线4Gy全身照射(TBI),剂量率0.5Gy/min。照射后4小时内进行干细胞髓腔内注射和尾静脉注射。髓腔内注射具体步骤如下:将受鼠腹股沟至膝关节间鼠毛刮去,用刀片在大腿作1个5mm左右切口,膝关节弯曲90°,暴露胫骨近端,1ml注射器针头通过髌骨韧带经胫骨关节面插入胫骨骨

5、髓腔内,注入细胞。2天后腹腔注射CTX200mg/kg。实验分为3组:对照组:仅接受TBI和CTX,不进行干细胞移植;TVPBSCT组:尾静脉输注(tailveiniufusion)外周造血干细胞1×107/0.1ml;IBMPBSCT组:髓腔内输注外周造血干细胞1×107/10μl。对照组小鼠5只,其余两组各12只。骨髓细胞染色体制备移植后第15天,取TVPBSCT组和IBMPBSCT组存活小鼠各3只,腹腔内注射0.1%秋水仙碱(4mg/kg),3小时后脱臼处死,无菌取注射侧胫骨,冲洗骨髓腔制备骨髓细胞悬液,离心去上清液,加入37℃预热的0.075m

6、ol/lKCl8ml,混匀,在37℃水浴中处理15-20分钟,室温下加入新鲜配制的固定液(甲醇∶冰醋酸3∶1)1ml预固定,离心去上清液。加入固定液8ml,固定30分钟,再次离心去上清液。重复上述操作1次。最后加入1ml固定液,混匀。制片,油镜下计数Y染色体。移植物抗宿主病(GVHD)观察移植后每日观察各组小鼠体重、毛发、腹泻、体位、活动状况等,死亡小鼠取肝脏、脾脏、小肠和爪垫皮肤组织常规病理学检查,若小鼠出现弓背、翘毛、腹泻、精神萎靡和体重骤减等表现,肝、小肠和皮肤等组织病理学改变符合GVHD表现者,定为GVHD死亡。生存期超过30天定为长期生存。统计学处理

7、采用SPSS11.5统计软件进行处理,数据以均数±标准差(±SD)表示,两样本均数比较采用t检验,GVHD情况分析进行卡方检验,p0.05为差异有统计学意义。结果小鼠一般状况和GVHD移植后第5-6天开始,TVPBSCT组和IBMPBSCT组部分小鼠出现了弓背、翘毛、食欲下降、体重减轻、精神萎靡及腹泻等不同程度的GVHD表现,未予特殊处理,部分小鼠渐恢复正常,其中TVPBSCT组和IBMPBSCT组分别有3只和2只小鼠在移植后21天内死亡,病理检查符合GVHD表现。肝脏:肝细胞空泡样变,汇管区内有大量淋巴细胞浸润,可见灶状出血;脾脏:巢状结构破坏,可见

8、大量散在浸润的淋巴细胞、出血坏死灶及含

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