海绵状静脉畸形的实验与临床研究

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1、博士学位论文lIIII1111111111111111111111111111LIIIIILlUIY2256855海绵状静脉畸形的实验与临床研究博士研究生：白南指导教师：柳大烈教授摘要海绵状静脉畸形源于血管形态发生的异常，扩张的静脉包含薄的血管壁和异常的平滑肌。病变表现为蓝色、柔软、可被压缩，或可触及坚硬钙化的静脉石。静脉畸形包括了小范围局限性的皮肤静脉畸形以及涉及重要结构的多部位多层次的弥漫性畸形。因静脉畸形有不断发展的特征，使治疗尤为困难；随时间推移，尤其是在青春期，畸形会增大；静脉畸形治疗后容易

2、复发。经皮穿刺硬化疗法作为治疗静脉畸形的一线疗法，和手术相比最大的优点是没有外部瘢痕、很少有严重并发症，一般情况下比切除更安全有效。硬化疗法是把组织硬化剂注射到病变处，引起细胞破坏、血栓形成以及强烈的炎症反应，局部纤维化导致病变收缩。75．90％的患者有良好的结果，包括病变体积的缩小和症状的减轻。硬化治疗常需持续多次。在我国平阳霉素硬化治疗静脉畸形作为一种常规治疗方式，疗效确切。为指导应用，中华口腔医学会口腔颌面外科专业委员会脉管性疾病学组2011年建议了平阳霉素治疗静脉畸形方法，其中利多卡因作为一种

3、联合用药与平阳霉素配制成一定浓度药液注入畸形静脉中。利多卡因一方面作为酰胺类局麻药物，用于不同部位以阻断感觉神经而产生麻醉，其穿透性和扩散性强。治疗静脉畸形可减轻平阳霉素栓塞过程中因疼痛引起的反射性血管痉挛，使硬化药物更充分的填塞病灶。另_方面，利多卡因作为钙调蛋白阻滞剂对抗肿瘤药物有增敏作用。利多卡因、平阳霉素注入到畸形静脉中对血管内皮细胞的作用如何?利多摘要卡因是否在平阳霉素治疗静脉畸形过程中有协同作用?平阳霉素和利多卡因浓度的改变对临床治疗效果有何影响?本课题分为两个部分，第一部分采用昆明小鼠脾

4、脏作为人海绵状静脉畸形的动物模型，通过石蜡切片光镜观察、超薄切片电镜观察、末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞，Image．ProPlus6．0病理细胞图像分析系统比较细胞凋亡率，实时荧光定量PCR检测细胞凋亡因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶．3(Caspase．3)的表达，观察不同浓度利多卡因、不同浓度平阳霉素在不同时间对脾脏血管内皮细胞的毒性作用以及平阳霉素与不同浓度利多卡因联合用药时在不同时间对血管内皮细胞的毒性作用，探讨利多卡因是否对平阳霉素治疗海绵状静脉畸形有协同作用。第二部

5、分回顾性分析平阳霉素联合不同浓度利多卡因治疗海绵状静脉畸形，探讨利多卡因浓度对疗效的影响；回顾性分析不同浓度平阳霉素治疗浅表海绵状静脉畸形，探讨平阳霉素浓度对治疗效果晦影响，指导临床用药；回顾性分析低浓度平阳霉素治疗浅表静脉畸形，总结治疗效果。第一部分利多卡因影响平阳霉素治疗海绵状静脉畸形的实验研究实验1不同浓度利多卡因对小鼠脾脏血管内皮细胞的影响目的探讨利多卡因对血管内皮细胞的细胞毒性。方法将88只雌性昆明小鼠按随机区组设计原则随机分为4组，其中A组16只，为生理盐水对照组；实验组72只，分为B、C

6、、D三组，每组24只，分别为0．1％利多卡因组、O．2％利多卡因组、0．4％利多卡因组。每组又随机为4个日程组(2、5、8、14d组)，对照组每日程4只，实验组每日程6只。将小鼠用10％水合氯醛(3ml／kg)腹腔注射麻醉后，常规消毒、铺巾。分层切开皮肤、肌层、腹膜，切口长约1．0cm，将胃翻起显露其背侧的脾脏，钝性牵拉固定，用4号半针头沿脾脏长轴方向穿刺，对照组注射生理盐水0．3ml，实验组注射不同浓度盐酸利多卡因溶液0．3ml，边注射边匀速退针，稍加压迫针孔止血，分层缝合，继续饲养。术后第2、5、

7、8、14d处理对照组的4只小鼠，实验组B、C、Il博士学位论文D中的各6只小鼠。麻醉后，按照原切口再次开腹，游离并切断结扎脾脏周围血管及系膜，取出脾脏，去除脾脏头尾，将脾脏中段分割后，分别投入10％中性福尔马林及2．5％的戊二醛溶液中。HE染色，观察不同浓度、不同时间标本变化；TUNEL法检测细胞凋亡，每例标本制切片2张，用Image．ProPlus6．0病理细胞图像分析系统，将各组TUNEL标记切片进行分析。在400x光镜下，每张切片随机选择6个高倍视野的图片，分别计数每张切片中TUNEL阳性细胞比

8、率(=6个高倍视野的阳性细胞数／细胞总数x100％)并计算其平均值。电镜下观察血管内皮细胞变化。统计方法：正态分布计量资料采用均数-t-标准差(xq-S)描述，时间与处理因素的效应分析采用析因设计的方差分析，若交互作用有统计学差异，进一步分析单独效应。满足正态且方差齐的数据，采用单因素方差分析(One-wayANOVA)；非正态和(或)方差不齐的数据，采用Kruskal．WallisH秩和检验；若有统计学意义，用SNK法进一步做两两比较，P