rnai转基因家蚕抑制bmnpv抗性的研究

《rnai转基因家蚕抑制bmnpv抗性的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、RNAI转基因家蚕抑制BmNPV的抗性研究中文摘要已有研究表明利用RNAi技术通过干扰BmNPV复制的必需基因ie．1、lef-1和gp64，可以有效抑制BmNPV的增殖。然而，由于选择干扰的靶基因不同，抑制病毒复制的效率相差甚远，即时对于同一个基因，针对不同区域的siRNA其效率也有很大差异。为了探讨表达不同dsRNA的转基因家蚕对BmNPV的抗性，将已构建的带有短ref-1dsRNA表达盒的转基因载体pigA3．LEF-Neo，通过精子介导法导入家蚕(皓月)体内，通过GFP荧光和G418抗性双重筛选，结合PCR、点杂交等分子

2、生物学鉴定获得了转基因家蚕。对G6代2龄转基因家蚕接种BmNPV，结果显示转基因家蚕的死亡率比对照组下降了10％一30％，表明转基因家蚕对BmNPV的抗性有所提高；对接种BmNPV的5龄转基因家蚕的定量PCR检测结果显示转基因家蚕体内的lefllmRNA水平比对照组平均降低了72倍和26．5倍，最高下降了104倍，进一步表明表达1ef-1dsRNA的转基因家蚕抑制了BmNPVref-1基因的表达。同时，为了研究不同品系转基因家蚕对BmNPV的抗性，将带有长耙．1dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-IE-Neo通过精子介导法导

3、入家蚕(菁松)体内，对G1代研究结果表明抑制BmNPV的增殖。另外，我们还对菁松、皓月、苏菊(A、B系)、明虎(A、B系)和高白×皓月的这五种品系的二龄起蚕进行攻毒实验，同时与上述两种转基因家蚕进行抗性比较。研究结果表明不同品种的家蚕对病毒的抗性存在差异，但是总体上转基因家蚕比其它品种对病毒的抗性都要高。进一步证明了通过转基因技术可以增强家蚕对病毒的抗性。关键词：家蚕；BmNPV；RNAi；，萨1；ie-1；转基因；品种作者：叶秋霞指导教师：薛仁宇(副教授)StudyonResistencetoBmNPVofRNAi--tran

4、sgenicAbstractSilkwormNowadays，somestudiessuggestthattheuseofRNAitechnologycouldinhibitBmNPVproliferationbyinterferingtheviralgenesessentialforviralDNAreplication，suchas／e一1，tellandgp64．Butanotherproblemisthateventargetingthesamegenethesilentefficiencywillbemuchdiffe

5、rentwhenfocusingdifferentregionsofthegene．InordertOverifytheeffectthattransgenicsilkwormsexpressingdifferentdsRNArestrainproliferationofBombyxmorinucleopolyhedrovirusvirus(BmNPV)，thetransgenicvectorpigA3-·LEF··NeocontainingtefildsRNAandneogeneexpressioncassettewastra

6、nsferredintotheeggsofsilkworm(Haoyuestain)bysperm-mediatedgenetransferringmethods．ScreenedwithGFPandantibioticsG418，combinedidentificationofPCRandDothybridization，transformedsilkwormswereobtained．ThemortalityofG6．generationsecond--instartransgenicsilkwormsinfectedwit

7、hBmNPVdecreased10％to30％comparedwithnormalones，suggestingthattheresistancetoBmNPVonthetransgenicsilkwormshasimproved．Real-timePCRdemonstratedthatafterbeinginfectedthetel1mRNAfromG6-generationfifth-instardeclined72foldsand26．5foldsonaverage，atmost104folds，comparedwithn

8、ormalsilkworms．Theresultsfurtherconfirmedthatthetranscribed，旷1dsRNAintransgenicsilkwormsinhibitedtheexpressionofthetellgene．Meanwhi